肝细胞移植免疫学研究进展

一、肝细胞移植的免疫学研究进展（论文文献综述）

贾磊^[1]（2020）在《肝细胞移植治疗大鼠肝硬化合并小肝综合征的疗效观察》文中认为目的:评价肝细胞移植（Hepatocyte Transplantation,HCT）对大鼠肝硬化合并小肝综合征（Small-For-Size Syndrome,SFSS）的治疗效果。方法:运用分析纯四氯化碳皮下注射加乙醇饮用进行肝硬化大鼠模型建立,过程14周,成功建立肝硬化SD大鼠模型。将30只肝硬化SD大鼠随机分为A组（术前3天进行肝细胞移植,n=10）、B组（手术时进行肝细胞移植,n=10）、C组（空白对照组,n=10）并进行70%肝脏切除,于术后观察各组大鼠一般情况、生存率、不同时点血生化、相关基因及蛋白水平变化以及肝组织学情况。对符合正态分布的计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两组间比较,方差齐采用LSD-t检验,方差不齐采用Games-Howell检验。生存率比较采用log-rank检验。结果:A组大鼠术后苏醒时间小于1小时,术后12小时即有饮水及少许进食现象,术后24小时可见大鼠自主活动。B组大鼠苏醒时间最长约2小时,术后24小时有饮水,术后36小时有自主活动。C组大鼠术后苏醒时间最长约3.5小时,术后24小时少量饮水,至术后48小时见自主活动。A组术后存活率（90%,9/10）明显高于B组（50%,5/10）、C组（30%,3/10）组,生存率log-rank检验χ2=6.440,p=0.04,存在统计学差异;术后24小时A、B、C三组ALT平均值分别为:860.1±39.9 U/L、904.6±35.6 U/L、927.4±17.0 U/L（F=6.808,p=0.007）,AST平均值:896.3±44.7 U/L、923.8±31.6 U/L、950.0±16.3 U/L（F=3.666,p=0.047）,ALB平均值:25.6±0.5 g/l、24.8±0.6 g/l、23.4±0.4 g/l（F=26.577,p=0.000）,A组均好于其余两组,且A组恢复速度快于其余两组,至术后240小时三组ALT平均值分别为:97.8±10.0U/L、128.2±20.7 U/L、150.5±14.8 U/L（F=13.816,p=0.001）,AST平均值:108.7±10.8 U/L、142.0±14.1 U/L、161.0±21.2 U/L（F=17.220,p<0.001）,ALB平均值:29.1±0.6 g/l、28.0±0.2 g/l、27.0±0.2 g/l（F=15.629,p=0.001）,均具有统计学意义;术后72、240小时IL-6、TNF-αm RNA相对表达量,A组明显低于B组及C组,但IL-1无明显差异。术后72、240小时IL-6、TNF-α蛋白表达量A组亦明显低于其他两组。术后72小时病理切片A组仅见细胞气球样病变,点状细胞坏死,少量炎性细胞浸润,B组见肝细胞排列紊乱,严重水肿,炎性细胞浸润,肝细胞点状坏死,C组大鼠见肝索结构消失,大块肝细胞坏死及炎性细胞浸润。结论:1.肝细胞移植可有效促进肝硬化大鼠术后小肝综合征肝功能恢复及提高生存率;2.治疗效果与细胞移植的时间点有关;3.肝细胞移植技术可为目前临床外科手术后肝功能肝衰竭的治疗提供一种新的治疗方法和思路。

袁伦志^[2]（2019）在《人骨髓间充质干细胞移植建立新型人类肝脏和免疫系统双嵌合小鼠模型用于乙型肝炎病毒感染诱发肝硬化初步研究》文中提出乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染在全球范围内造成了严重的疾病负担。HBV感染具有严格的宿主种属特异性和肝细胞嗜性,其感染人肝细胞后能够持续复制,诱发宿主免疫耐受状态、逐步形成慢性化、直接或间接诱导一系列病理生理学变化并造成重症肝炎、肝衰竭、肝纤维化、肝硬化和肝癌等终末期肝脏疾病。目前,虽然预防性疫苗的普及已经在很大程度上控制HBV新发感染率,但是已批准上市的临床药物仍然无法彻底清除病毒,实现功能性治愈。由于HBV的天然宿主人类和猩猩等大型灵长类动物用于研究收到严格的伦理限制,因此发展能够最大限度模拟HBV感染和发病的动物模型成为进一步认识HBV感染发病机制,以及研发和评价新一代抗HBV药物所面临的一项挑战。数十年来,研究人员建立了转基因小鼠、尾静脉高压注射小鼠、旱獭、北京鸭和树鼩等替代模型,然而它们都不能完全模拟HBV在人类中感染发病的自然史,因此,建立人源化小鼠动物模型,特别是人肝和人免疫系统双嵌合的人源化小鼠动物模型,用于支持HBV感染发病相关研究具有相当的重要性。然而,目前已有的人源化小鼠动物模型一直存在原代人细胞来源匮乏和体外难以扩增、个体差异大、多种细胞移植不匹配、伦理问题、造模周期长、实验窗口期短和难以模拟HBV感染相关的终末期肝脏疾病等限制。因此,建立一种方便易用的、能够支持HBV感染发病研究的新型人源化小鼠动物模型对于进一步推进HBV相关基础研究和治疗策略的发展十分必要。本论文中,我们利用临床分离的健康人骨髓间充质干细胞（human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs）在免疫缺陷小鼠体内同时重建了同源的人源肝脏和免疫系统,并将此种双嵌合人源化小鼠用于乙肝病毒感染及相关病理生理学研究。我们对乙肝病毒的生物学特征、流行病学、感染自然史、相关肝脏疾病、天然宿主动物、感染细胞和动物模型等方面进行综述研究,基于前期研究和对最新研究成果的考察,我们发现hBMSCs具有重建人类肝脏和免疫系统的巨大的潜力,并选择其作为我们构建新型双嵌合人源化小鼠模型的细胞材料。我们使用hBMSCs移植暴发性肝衰竭免疫缺陷FRGS小鼠,发现其能够在小鼠体内迅速转分化为具有活性的人肝细胞和多种人免疫细胞,同时证明暴发性肝衰竭的肝脏微环境是驱动hBMSCs在免疫缺陷FRGS小鼠体内大量快速转分化为人源肝细胞和免疫细胞的重要驱动因素。我们在hBMSCs移植的免疫缺陷FRGS小鼠（hBMSC-FRGS）体内建立了HBV慢性感染,实现A,B,C,D四种常见HBV基因型病毒感染超过50周。我们连续监测了 HBV感染后hBMSC-FRGS小鼠血清和肝内病毒DNA及蛋白水平,证明被HBV感染的小鼠血清内含有具备感染活力的HBV病毒颗粒。我们初步研究了HBV感染后hBMSC-FRGS小鼠体内的免疫病理生理学变化,在感染进行和持续和过程中同步分析了小鼠肝内人源免疫细胞、人源细胞因子、肝脏炎症进展和HBV特异性人源抗体水平等指标,证明HBV感染后hBMSC-FRGS小鼠出现持续的肝脏炎症和免疫耐受状态。我们在HBV感染后hBMSC-FRGS小鼠体内观察到一系列的指示肝硬化发生发展的典型性指标,包括:肝硬化血清学指标持续增高、小鼠肝脏组织中肝硬化相关人源基因表达持续上调、小鼠肝脏组织中胶原纤维堆积持续增加、纤维结节生成、肝小叶结构被破环、肝板塌陷、肝脏外表粗糙体积固缩等。综上所述,我们建立了肝脏和免疫系统双重人源化的hBMSC-FRGS小鼠模型,将其用于HBV感染和相关免疫病理生理学研究,并通过长期观察发现HBV感染后小鼠产生肝脏炎症并且逐步发展为典型的肝硬化。

韩博,徐三荣,张进,周庆,李伟^[3]（2013）在《同基因与异基因胚胎肝干细胞移植治疗小鼠肝硬化》文中研究指明背景:胚胎肝干细胞移植免疫相关研究较少,同基因与异基因胚胎肝干细胞移植对小鼠肝硬化的治疗作用,目前尚不清楚。目的:观察同种同基因与同种异基因胚胎肝干细胞移植对小鼠肝硬化的治疗作用,以及治疗过程中免疫排斥反应发生情况。方法:采用Ⅳ型胶原酶消化法分离纯化BALB/c与C57BL/6胚胎肝干细胞。104只健康BALB/c小鼠随机分为4组:正常对照组不予任何处理;肝硬化组、同种同基因移植组、同种异基因移植组腹腔注射四氯化碳石蜡油溶液复制肝硬化模型,16周后分别经其尾静脉注射生理盐水,等量同种同基因胚胎肝干细胞和同种异基因胚胎肝干细胞。在移植4周后比较各组受体小鼠存活情况、肝功能恢复情况、肝纤维化程度、免疫细胞（CD4+T、CD8+T、NK、NKT）数目及比值、肝脏病理学变化。结果与结论:同种同基因移植组和同种异基因移植组生存率均为100%,与肝硬化组小鼠存活率67%相比差异有显着性意义（P<0.05）;各组肝功能和肝纤维化指标差异无显着性意义（P>0.05）。各组免疫学指标比较差异无显着性意义（P>0.05）。肝脏组织病理学显示肝组织修复:同种异基因移植组>同种同基因移植组>肝硬化组。因此,经尾静脉移植胚胎肝干细胞能提高肝硬化小鼠的生存率、减轻肝细胞坏死程度;同种同基因与同种异基因胚胎肝干细胞移植未发现免疫排斥,对小鼠肝硬化有一定的治疗作用。

魏玲玲,邓绍平,黄孝伦^[4]（2012）在《肝细胞移植治疗急性肝功能衰竭的免疫排斥研究》文中研究说明目的研究肝细胞腹腔移植治疗急性肝功能衰竭的免疫排斥反应。方法用胶原酶灌注法分离幼猪及BALB/c和C57BL/6小鼠肝细胞;用腹腔注射CCl4的方法建立C57BL/6急性肝功能衰竭模型;将实验动物分为同基因移植组、同种异基因移植组和异种移植组。各组动物肝细胞移植入急性肝功能衰竭小鼠腹腔内,观察受体小鼠存活情况,比较各组动物T细胞亚群、免疫球蛋白水平和细胞因子的变化。结果①受体小鼠存活情况:同基因移植组为8/10,同种异基因移植组为6/10,异种移植组为3/10,同基因移植组和同种异基因移植组受体的生存情况明显好于异种移植组（P<0.05）。②T细胞亚群变化:移植后7 d内,同基因移植组外周血中CD4+和CD8+T细胞均无明显变化,同种异基因移植组CD4+T细胞于移植后3 d时达高峰（P<0.05）,而CD8+T细胞7 d内无明显变化,异种移植组CD4+和CD8+T细胞移植后7 d内均明显升高,且于移植后3 d时达高峰（P<0.05）。③免疫球蛋白水平:同基因移植组血清免疫球蛋白IgM和IgG水平在移植后0.5、1和3 d时未见明显变化,同种异基因移植组和异种移植组的IgM在移植后1 d时达高峰（P<0.05）,而IgG在移植后3 d时达高峰（P<0.05）。④血清细胞因子水平:移植后7 d,同种异基因移植组和异种移植组的IFN-γ、TNF-α及IL-2血清浓度明显高于同基因移植组（P<0.05）;异种移植组的IL-6血清浓度明显高于同基因移植组和同种异基因移植组（P<0.05）。结论无论同种还是异种肝细胞移植,初期均发生了强烈的CD4+及CD8+T细胞参与的细胞免疫和较强体液免疫反应。

刘一人^[5]（2011）在《吲哚胺2，3-二氧化酶在同种异体移植肝细胞内的表达及作用》文中研究说明目的:研究携带吲哚胺2,3-二氧化酶（indoleamine2,3-dioxygenase,IDO）的肝细胞在同种异体脾内的表达及作用机制。方法:BABL/c肝细胞移植C57BL/6小鼠脾内,随机分为四组:Ⅰ组:携带IDO腺病毒组;Ⅱ组:携带IDO腺病毒+1-MT（1-甲基色氨酸）组;Ⅲ组:空壳腺病毒;Ⅳ组:单纯肝细胞移植。转染后36-48小时采用门静脉灌注法分离肝细胞并离心进行纯化,荧光显微镜观察EGFP的瞬时表达情况,计算转染率,用台盼蓝拒染法检查细胞活性,分别用RT-PCR、Western Blot技术对IDO的表达情况进行检测。将肝细胞进行脾内移植,术后2、5日处死小鼠取脾脏,做免疫组化检测IDO表达情况,并进一步做TUNEL检测脾脏淋巴细胞凋亡情况。结果:成功分离并纯化肝细胞,数量为1.62×108/只,转染率为24.7%,活性为95%。RT-PCR、Western- Blot可以检测到IDO基因及蛋白质表达。免疫组化显示Ⅰ组脾脏有IDO阳性的肝细胞。TUNEL显示Ⅰ组与与其他组比较,差异有统计学意义（P<0.05）,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组之间比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论:携带IDO的肝细胞能在同种异体脾内稳定表达,并能诱导脾内淋巴细胞的凋亡。

王泽^[6]（2009）在《人肝细胞—乳鼠原位移植模型构建中细胞免疫机制的研究》文中进行了进一步梳理背景和目的近年来通过异种肝细胞移植的手段,解决同种供体短缺的问题已成为全球研究的热点。虽然异种肝细胞移植在短期内改善肝脏先天性酶缺陷和血液系统病变及急、慢性肝衰竭等方面的有效性已在动物实验模型中得到证实,但其后发生的免疫排斥问题仍然成为阻碍异种肝细胞移植在临床中得以广泛应用研究的最大难题。目前,有关异种肝细胞移植的免疫排斥机制的研究主要存在以下几个问题:一、异种移植物会面临来自受体更激烈,更迅速的免疫排斥,在几小时内就可能完全丧失功能或坏死,因而有关异种细胞移植中免疫排斥的动态研究不能很好地开展。二、相对于同种肝细胞移植,T淋巴细胞介导免疫排斥在异种肝细胞移植过程中的作用尚存在争议,有关异种肝细胞原位移植的免疫排斥机制鲜有报道。三、异种移植中的免疫排斥反应常因移植物种类的不同,所带抗原数量、强度以及受者的免疫功能状态的差异,特别是具体到某一器官如肝脏,其免疫排斥反应将各具其特殊性。针对上述问题,我们根据发育免疫学原理,对课题设计进行了可行性分析:首先,肝脏在移植领域被成为“免疫特惠器官”,长期临床研究发现肝脏移植后急性排斥反应的发生率及严重程度远远低于其它器官,具有独特的耐受原性;同时,肝脏是甲胎蛋白的主要合成及分泌器官,甲胎蛋白是一种胚胎性肿瘤相关蛋白,免疫应答中的AFP主要表现为免疫抑制的生物学特征,而小鼠出生后一段时间内AFP在肝脏仍保持着较高水平的表达;因此,我们认为该发育阶段的肝脏免疫微环境具有适合异种移植的特殊性。另外,针对“外来细胞抗原所致免疫耐受”的现象,研究认为免疫系统接触外来抗原所产生的免疫耐受程度与免疫系统发育未成熟有关。如果我们在受体免疫系统发育的早期给予异种抗原的移植,将会减缓受体的异种免疫排斥,或者直接形成耐受。综上所述,我们选用新生小鼠肝脏作为移植受体,设想该发育阶段的肝脏微环境会缓解或者推迟机体的免疫排斥的强度或速度,将有利于免疫排斥发生的动态过程及其相关机制的研究。同时,鉴于主要组织相容性抗原为移植排斥反应发生的主要移植抗原,它由种系基因构成,代表了某个物种在进化上的特异性。肝癌细胞不仅具有与人类正常肝细胞相同的移植抗原,同时作为正常肝细胞的替代物在肝脏相关疾病的实验性治疗中被证明有良好的效果。因此,本实验选用3株人肝癌细胞,1株人正常肝细胞及1株人肺癌细胞作为待选异种移植物,通过对比筛选合适的受一供体组合,力图建立一种理想的人肝细胞一乳鼠异种原位移植模型,并系统地对移植过程中细胞免疫排斥的时程变化及其相关机制进行研究。研究方法1、人肝细胞—乳鼠原位移植模型的探索性构建1)根据动物模型构建方法,体外肝部直接注射进行五种人相关细胞的原位移植;2)活体荧光染料DiI标记技术对移植的人细胞进行受体内的定位示踪;3)解剖观察移植细胞在乳鼠肝内的移植成功率及生长状况;4)常规病理技术分析各组人细胞在乳鼠肝内的免疫病理发展过程;5)免疫组化检测移植物在受体内AFP及Suvivin蛋白的表达状况。2、乳鼠血清AFP表达特征与肝细胞移植微环境的关系1)等数量级的人肝癌细胞HepG2分别进行乳鼠皮下及肝内原位移植,成鼠原位移植不同数量级的HepG2细胞;2)活体荧光染料DiI标记技术对移植细胞进行受体内定位示踪;3)常规病理切片对比分析移植细胞在各移植部位免疫病理学过程;4)定量ELISA检测移植前后乳鼠血清AFP的动态变化特征。3、人肝细胞—乳鼠原位移植中细胞免疫排斥机制的研究1)利用免疫调节剂（CsA,PolyI:C）分别设置免疫激活及免疫抑制两个参照状态;2)不同免疫状态下人肝细胞—乳鼠原位移植模型的构建;3)不同免疫状态下移植细胞免疫病理过程的变化;4)NK细胞杀伤活性的检测;5)刀豆蛋白诱导的T淋巴细胞活性的检测;6)流式分析T淋巴细胞亚群分布的变化;7)定量ELISA检测小鼠IL-2,IL-10血清水平的变化特征。研究结果第一部分解剖观察移植情况肝癌细胞移植组均具有较高的移植成功率,个案伴有一定程度的肝内转移。人肺癌细胞移植成功率较低,并伴有消退趋势。人正常肝细胞移植组仅2个案例肝脏观察到异常部位。活体荧光染料Dil的定位分析荧光定位分析确定解剖观察到的结节组织为移植或转移的人细胞,各组肝癌细胞在肝内占位明显,荧光信号均匀稳定;人肺癌细胞占位较小;人正常肝细胞组解剖观察到的异常部位为荧光染料非特异性着色,无细胞性结构。常规病理切片分析原位移植初期（0-5天）,人肝癌细胞保持着良好的肿瘤形态特征,8天前后移植区域逐渐出现淋巴细胞的浸润,移植物的相继坏死,发生肝内转移的人肝癌细胞至实验结束未出现淋巴细胞的浸润及坏死。原位移植的人肺癌细胞于移植后5天出现明显的淋巴细胞浸润及严重坏死。免疫组织化学检测原位移植及转移的各组人癌细胞均保持着原有的蛋白表达特征:Bel7402与HepG2:AFP+;SK-Hep-1与A549:AFP-;Survivin全部阳性表达。第二部分人肝癌细胞HepG2的乳鼠皮下移植皮下移植物于移植第2天出现淋巴细胞的浸润及后续的严重坏死,并于移植后2周完全消退。人肝癌细胞HepG2的成鼠肝内移植仅有10%的个案形成类似乳鼠原位移植的移植物结节,移植物于移植后24小时出现明显的淋巴细胞浸润,或被炎症细胞包裹,人肝癌细胞空泡化继而坏死,移植细胞数量级的增大,并未缓解免疫排斥反应出现的强度与速度。AFP血清浓度变化正常昆明种小鼠:AFP血清浓度出生后三天内保持较高水平的表达,并于出生后两周恢复至成体水平,痕量。人肝癌细胞的移植引起乳鼠肝脏AFP的特异性再表达,于移植后的5-9天保持高水平的血清浓度,与正常小鼠有显着差异。人正常细胞与人肺癌细胞的移植,及成鼠肝内的移植未引起血清水平的显着变化。乳鼠皮下移植未引起AFP血清浓度的变化。第三部分免疫调节剂的影响CsA组:移植物占位偏大,形态不规则,移植细胞呈侵袭性生长;于实验第14天移植区域出现微弱的淋巴细胞浸润,发展趋势缓慢,移植后35d内移植物未出现明显坏死。PolyI:C组:移植物占位明显小于正常移植组,移植后第2天就出现明显的淋巴细胞浸润,并于移植后第5天出现大面积坏死。NK细胞杀伤活性移植组:移植后第4天NK细胞杀伤活性明显升高,CsA组:NK细胞杀伤于移植后呈缓慢上升趋势,总体水平低于移植组,PolyI:C组NK细胞杀伤活性一直保持较高水平,与其它两组差异显着。T淋巴细胞的转化活性移植组:移植第7天T淋巴细胞转化活性由缓慢上升转为明显升高,具有显着性;CsA组与PolyI:C组的T细胞转化活性皆缓慢上升,无大幅度变化,PolyI:C组最高,CsA组最低。T淋巴细胞亚群的分布出生后小鼠T细胞分化尚未完善,CD4+,CD8+T细胞数量随时间不断增加。移植组CD4+与CD8+T细胞在各时间点皆高于正常小鼠,CD4+T细胞数量增长较快,于移植后11天CD4+/CD8+比值达到最高值,显着高于其它组。CsA组CD4+T细胞百分含量位于各组最低,CD4+/CD8+比值出现紊乱直至逆转。PolyI:C组CD4+与CD8+T细胞百分率增长速率明显高于其它组,CD4+/CD8+比值略高于正常小鼠。细胞因子IL-2,IL-10的表达特征移植组小鼠于移植后第3天IL-2血清浓度降至最低,IL-10达到最高浓度,随后逆转,第7天IL-2浓度诱生至最高点,IL-10浓度降至最低点;CsA组IL-2受到明显的抑制,IL-10浓度较其它组最高;PolyI:C组IL-10浓度低于移植组,IL-2浓度显着高于其它实验组。研究结论1、首次对昆明种小鼠出生后血清甲胎蛋白的表达特征进行了定量分析,与BALB/c/J,BALB/c/BOM and C3H/He等种系小鼠具有相似的表达模式。2、乳鼠肝脏内AFP高水平的表达可保证异种移植物的存活,推迟T细胞诱导的异种移植免疫排斥反应的发生。3、针对异种肝细胞移植中细胞免疫排斥反应的动态研究,本实验构建的人肝细胞—乳鼠异种原位移植模型是一种良好的研究平台。4、异种移植细胞免疫排斥过程中,NK细胞活性的诱发早于T细胞,但是对移植物的存活未形成明显的影响。5、CD4+淋巴细胞是介导免疫排斥反应中的主要T细胞亚群,CD4+/CD8+T淋巴细胞比率的失调甚至逆转导致个体免疫排斥的发生。6、激活的CD4+T0淋巴细胞经历了向T1诱导分化的免疫偏移,高水平表达的TH1类细胞因子（IL-2）介导了细胞免疫排斥的效应期,可以作为T细胞引发的免疫排斥反应的评价指标。7、单纯使用免疫抑制剂CSA并未能完全抑制异种肝细胞移植中细胞免疫排斥的发生,只起到了延缓的作用。

蔡鸿宇,陈钟^[7]（2007）在《肝细胞移植免疫排斥反应的研究与应用》文中认为学术背景:肝细胞移植有望成为治疗急慢性肝衰竭及肝脏相关遗传性疾病的一种新方法。近年来肝细胞移植研究取得了重大进展,但免疫排斥反应仍是制约该技术进一步发展的主要原因之一。目的:综合分析肝细胞移植后免疫排斥反应的研究进展。检索策略:由两位作者应用计算机检索中国知网（www.cnki.net）及Medline（www.pumed.com）1998-01/2007-06有关肝细胞移植免疫排斥反应的文献,中文检索词"肝细胞,移植,排斥";英文检索词"hepatocyte,transplan tation,rejection"。初检得到281篇文献,包括中文109篇,英文172篇。排除研究目的与肝细胞移植免疫排斥反应无关者72篇,内容重复性的文献41篇,保留168篇中英文文献进一步分析。其中动物实验和细胞学实验103篇,综述类文献28篇,临床研究37篇。按纳入标准筛选,共37篇文献满足全部纳入标准。凡同种或异种肝细胞培养、移植及生物人工肝研究中与免疫排斥反应相关的文献均纳入文献综述范围,与此无关者均排除。不采用未发表的文献。文献评价:所有文献均为随机对照试验。资料综合:肝细胞移植免疫排斥反应是影响肝细胞移植效果的重要因素。随着细胞生物学、移植免疫学的发展,肝细胞移植免疫排斥反应的机制将会进一步得到阐明。各种抑制免疫排斥的手段,尤其基因工程技术、纳米材料的应用有可能在肝细胞移植后抗原的识别、活化和发生效应的环节中以及抑制移植细胞的凋亡方面起到一定的作用。结论:肝细胞移植目前面临的主要问题是移植后的免疫排斥反应,其具体机制仍有待于进一步阐明。现阶段采取的抑制肝细胞移植后免疫排斥的方法均有一定的局限性,更有效的方法有待于继续探索。

刘妍芳^[8]（2007）在《微囊化罗非鱼肝细胞移植治疗大鼠急性肝功能衰竭的实验观察》文中研究指明目的:1.建立罗非鱼肝细胞的分离及纯化方法。2.应用微囊化法对罗非鱼肝细胞进行免疫隔离。3.观察微囊化罗非鱼肝细胞移植对肝衰大鼠的治疗作用。4.探讨鱼纲与哺乳纲动物间肝细胞移植的可能性。材料和方法:1.采用胶原酶冷消化法和两步低速离心法分离罗非鱼肝细胞。应用倒置显微镜和透射电镜观察罗非鱼肝细胞形态及其超微结构。采用台盼蓝拒染法检测细胞活力。2.D-GalN（D-galactosamine,D-氨基酸半乳糖盐酸盐）大鼠腹腔内注射,建立急性药物性肝衰模型。3.采用ACA（Alginate-Chitosan-Alginate,海藻酸钠—壳聚糖—海藻酸钠）微囊包裹罗非鱼肝细胞移植入肝衰大鼠模型腹腔内,即微囊化罗非鱼肝细胞移植组（简称微囊化组,N=35只）;并设立空微囊移植组（空微囊组,N=28只）、裸肝细胞移植组（裸肝细胞组,N=35只）及NS（Normal saline,生理盐水）对照组（NS组,N=28只）等作为实验对照。4.比较移植后各组肝衰大鼠的一周存活率;于移植后24h和48h分别取各组存活大鼠5只经腹主动脉取血作肝功能检测,观察谷丙转氨酶、总胆红素和白蛋白的变化;分别在24h、48h、7d和14d时间点上对移植物进行光镜和电镜的病理检查。结果:1.平均每条鱼获得0.93±0.22×108个肝细胞,台盼蓝染色示肝细胞活率为90.1±0.79%,纯度为89.75±1.92%。光镜下新分离的肝细胞呈透亮圆球形,形态大小一致,少数聚集成团。透射电镜示罗非鱼肝细胞细胞质内可见大量圆形或卵圆形线粒体和糖原颗粒;粗面及滑面内质网较多;细胞核形状较为规则,大而圆,核仁清晰。2.制备好的空微囊多为圆形,边缘清晰,内部为透明凝胶液体,外部膜结构完整。包裹肝细胞大部分居于微囊内部,仅有少量肝细胞贴于囊壁上。3.移植后受体一周存活率比较:微囊化组受体一周存活率为57.9%明显高于裸肝细胞组（21.1%,P<0.05）;与空微囊组（16.7%）、生理盐水组（16.7%）比较亦有显着性差异（P<0.05）;而裸肝细胞组、空微囊组和生理盐水组三组组间比较差异不显着（P>0.05）。4.移植48h后受体肝功能检测:（1）微囊化肝细胞组ALT为1103.9±132.4U/L,明显低于裸肝细胞组（2188.3±185.4U/L,P<0.01）;与空微囊组（2257.8±283.3U/L）、生理盐水组（2379.2±168.7U/L）比较亦有显着性差异（P<0.01）;而裸肝细胞组、空微囊组和生理盐水组三组组间比较差异不显着（P>0.05）。（2）微囊化肝细胞组TBIL为6.21±0.86μmol/L,明显低于裸肝细胞组（9.18±0.96μmol/L,P<0.05）;与空微囊组（8.82±0.93μmol/L）、生理盐水组（8.76±0.74μmol/L）比较亦有显着性差异（P<0.05）;而裸肝细胞组、空微囊组和生理盐水组三组组间比较差异不显着（P>0.05）。（3）微囊化肝细胞组ALB为23.2±1.14g/L,明显低于裸肝细胞组（21.0±1.98g/L,P<0.05）;与空微囊组（20.6±1.34g/L）、生理盐水组（19.3±1.22g/L）比较亦有显着性差异（P<0.05）;而裸肝细胞组、空微囊组和生理盐水组三组组间比较差异不显着（P>0.05）。5.各组移植物病理检查:裸肝细胞在移植后48h即可见腹腔内有较多白色团块粘附于大网膜上,收集移植物组织HE染色后光镜检查可见腹膜将移植的裸肝细胞包裹为细胞团块,周围大量炎症细胞浸润,肝细胞多已变性坏死;而微囊化组在移植后48h,可从受体腹腔中收集到形态完整的微囊,其内肝细胞活力良好,台盼蓝染色示肝细胞活率可达到80%。移植后7d,微囊化组受体腹腔内可见到形态完整、无明显粘连的微囊。其内肝细胞存活良好,将微囊压碎后,肝细胞台盼蓝染色活力达45.3±5.8%。透射电镜观察可见微囊内罗非鱼肝细胞结构正常,细胞核形状较为规则。移植后14天大体观察见含罗非鱼肝细胞的微囊主要粘附于肠壁、网膜、肝脏下缘和侧腹壁,少量微囊粘聚成团,周围可见血管形成。将微囊压碎后,肝细胞台盼蓝染色活力仍可达34.7±4.0%。结论:1.胶原酶冷消化法分离的罗非鱼肝细胞形态完整、活性良好,产量和纯度均较高,是一种较好的分离方法。2.移植后罗非鱼肝细胞能在微囊内较长期存活,具有较强的耐低氧能力。3.ACA微囊可起到良好的免疫隔离作用,有利于移植物的长期存活,并且其具有较好的生物相容性,较为有效的避免了囊周纤维化的发生。4.微囊化包裹罗非鱼肝细胞腹腔内移植有助于大鼠急性药物性肝衰的逆转,显着提高急性肝衰大鼠的存活率、改善肝功能、减轻肝脏病理改变。

李晓斌^[9]（2006）在《骨髓干细胞诱导分化的肝细胞移植对大鼠肝切除术后肝衰治疗作用的实验研究》文中研究表明研究背景和目的： 原位肝移植（orthotopic liver transplantation, OLT）是目前治疗急性肝功能衰竭、终末期肝病和代谢性肝病最有效的方法，但由于供肝缺乏等原因在临床广泛开展仍有一定的困难。肝细胞移植（hepatocyte transplantation，HCT）与原位肝移植比较，具有价廉、操作简单、可重复进行、移植细胞可以体外培养增殖及冷冻保存，还可以进行基因修饰等优点。研究发现HCT可以纠正先天性肝脏代谢缺陷、辅助肝功能支持和替代受损肝实质。随着HCT在理论与技术方面不断发展，已逐渐呈现出替代OLT治疗肝病的潜力，当前肝细胞来源短缺、肝细胞移植后增殖能力差及免疫排斥等问题是限制HCT发展的主要原因。 骨髓干细胞（bone marrow stem cell, BMSC）可以横向分化为肝前体细胞和肝细胞，并具有取材容易；增殖能力强；体外培养、传代及扩增容易；可以直接取材于患者本人，能避免移植后免疫排斥反应的发生等特点。用BMSC替代成熟肝细胞进行移植治疗肝病，有望使细胞移植在肝病治疗方面取得重大突破。 BMSC可以通过两种方式对肝脏进行修复，一是直接进行BMSC移植，然后BMSC在体内分化为肝细胞并增殖，从而使肝脏得以修复；二是体外诱导BMSC定向分化为肝细胞或肝前体细胞并传代扩增后再进行移植。目前的研究大都直接进行BMSC移植，关于移植骨髓干细胞体外诱导分化的肝细胞治疗急性肝衰的研究国内外尚无相关报道。 本实验主要研究目的：探讨骨髓干细胞诱导分化的肝细胞移植对肝切除术后肝衰大鼠的治疗作用。 研究方法： 1、复苏大鼠骨髓干细胞诱导分化的肝细胞及检测其功能

江海洪^[10]（2006）在《小鼠胚胎干细胞向肝前体细胞诱导分化及其对实验性急性肝衰竭的移植治疗研究》文中进行了进一步梳理背景在各种干细胞（stem cells, SC）的应用研究中,胚胎干细胞（embryonic stem cells, ES细胞）由于具有发育全能性、种系传递能力（形成嵌合体）以及便于进行遗传学的基因改造而最引人注目,发展最快,且ES细胞作为研究的基本工具和潜在的细胞治疗来源继续强烈吸引着人们的注意力。在国外,1981年英国的Evans等和美国的Martine分别成功地分离和体外培养了小鼠ES细胞,建立了小鼠ES细胞系,而且证实了该ES细胞系具有发育全能性,能在体外诱导分化为各种类型的组织细胞。特别是继1998年James Thomson博士建立人ES细胞系之后,世界上其他许多科学家也相继成功地从囊胚内细胞团分离并建立了ES细胞系。目前,在NIH注册的ES细胞有83个系,分别来自不同的国家。据报道,ES细胞目前已有在体外培养两年,连续传代达450次以上,而胚胎生殖干细胞传代次数最多可达7080次。更令人兴奋的是,科学家们已经开始对ES细胞进行基因改造,实现了转基因表达和基因的同源重组,这意味着将可以有针对性地改变ES细胞的遗传表型,如采用基因敲除技术等。所有这些重要突破都使ES细胞用于各种终末期疾病的治疗更接近于现实的需要。我国早在80年代就开始了ES细胞的研究,近几年来,ES细胞的研究更是发展迅猛,国内不少研究机构以及政府职能部门对ES细胞的研究也表现出高度的重视和极大兴趣,为ES细胞研究专门组织了“973项目”和“863项目”。目前在全国范围内已形成了一支干细胞研究的庞大队伍。李凌松教授在北京成立了干细胞研究中心,筹建组织干细胞库,进行了组织干细胞的诱导分化以及干细胞对疾病治疗的动物实验和临床试用,如神经干细胞对帕金森氏病和角膜干细胞对角膜损伤的治疗等。卢光绣教授在湖南湘雅医学院自1999年以来一直致力于治疗性克隆的研究。广州中山大学黄绍良教授等利用人受精卵发育形成的囊胚内细胞团建立了3株人类ES细胞系。上海中科院亦于1999年投资建立了盛慧珍教授主持的上海市发育生物学重点实验室,集中进行治疗性克隆的研究,在2003年就曾报道采用细胞共培养技术已将小鼠ES细胞诱导为类肝细胞,该肝细胞能表达成熟肝细胞标志物如酪氨酸氨基转移酶、葡萄糖-6-磷酸酶

二、肝细胞移植的免疫学研究进展（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、肝细胞移植的免疫学研究进展（论文提纲范文）

（1）肝细胞移植治疗大鼠肝硬化合并小肝综合征的疗效观察（论文提纲范文）

（2）人骨髓间充质干细胞移植建立新型人类肝脏和免疫系统双嵌合小鼠模型用于乙型肝炎病毒感染诱发肝硬化初步研究（论文提纲范文）

（3）同基因与异基因胚胎肝干细胞移植治疗小鼠肝硬化（论文提纲范文）

（4）肝细胞移植治疗急性肝功能衰竭的免疫排斥研究（论文提纲范文）

（5）吲哚胺2，3-二氧化酶在同种异体移植肝细胞内的表达及作用（论文提纲范文）

（6）人肝细胞—乳鼠原位移植模型构建中细胞免疫机制的研究（论文提纲范文）

（7）肝细胞移植免疫排斥反应的研究与应用（论文提纲范文）

（8）微囊化罗非鱼肝细胞移植治疗大鼠急性肝功能衰竭的实验观察（论文提纲范文）

（9）骨髓干细胞诱导分化的肝细胞移植对大鼠肝切除术后肝衰治疗作用的实验研究（论文提纲范文）

（10）小鼠胚胎干细胞向肝前体细胞诱导分化及其对实验性急性肝衰竭的移植治疗研究（论文提纲范文）

四、肝细胞移植的免疫学研究进展（论文参考文献）

• [1]肝细胞移植治疗大鼠肝硬化合并小肝综合征的疗效观察[D]. 贾磊. 贵州医科大学, 2020(04)
• [2]人骨髓间充质干细胞移植建立新型人类肝脏和免疫系统双嵌合小鼠模型用于乙型肝炎病毒感染诱发肝硬化初步研究[D]. 袁伦志. 厦门大学, 2019(08)
• [3]同基因与异基因胚胎肝干细胞移植治疗小鼠肝硬化[J]. 韩博,徐三荣,张进,周庆,李伟. 中国组织工程研究, 2013(36)
• [4]肝细胞移植治疗急性肝功能衰竭的免疫排斥研究[J]. 魏玲玲,邓绍平,黄孝伦. 中国普外基础与临床杂志, 2012(02)
• [5]吲哚胺2，3-二氧化酶在同种异体移植肝细胞内的表达及作用[D]. 刘一人. 福建医科大学, 2011(09)
• [6]人肝细胞—乳鼠原位移植模型构建中细胞免疫机制的研究[D]. 王泽. 山东大学, 2009(05)
• [7]肝细胞移植免疫排斥反应的研究与应用[J]. 蔡鸿宇,陈钟. 中国组织工程研究与临床康复, 2007(47)
• [8]微囊化罗非鱼肝细胞移植治疗大鼠急性肝功能衰竭的实验观察[D]. 刘妍芳. 同济大学, 2007(10)
• [9]骨髓干细胞诱导分化的肝细胞移植对大鼠肝切除术后肝衰治疗作用的实验研究[D]. 李晓斌. 中国协和医科大学, 2006(11)
• [10]小鼠胚胎干细胞向肝前体细胞诱导分化及其对实验性急性肝衰竭的移植治疗研究[D]. 江海洪. 第三军医大学, 2006(11)

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