一、HiTrapQ柱FPLC快速纯化人血清白蛋白(HSA)（论文文献综述）
张帆[1]（2011）在《双水相萃取偶联柱层析分离纯化重组白蛋白》文中研究说明人血清白蛋白为人体血浆中含量最丰富的蛋白,具有很多重要的生理功能。临床上可作为很多疾病的药品治疗剂,还可作为生物产品的保护剂和赋形剂及细胞培养的添加成分,得到了广泛应用。近年来大规模生产重组人血清白蛋白作为血源白蛋白替代品。针对从高密度发酵液中分离纯化重组人血清白蛋白中存在的固液分离困难、工艺复杂、杂质难去除等问题,本论文从以下方面做了探索性研究。首先,考察了不同乙醇/无机盐双水相体系对重组人血清白蛋白的萃取能力,其中乙醇/磷酸氢二钾双水相体系的回收率最高,且在4-30℃的温度和1-30g/L的重组人血清白蛋白浓度均能保持较高萃取收率。该双水相体系能够直接从发酵液中萃取重组人血清白蛋白,当操作条件为乙醇20%（w/w）/磷酸氢二钾18%（w/w）时,重组人血清白蛋白回收率达到108.13%。综合考虑回收率和相比因素,选择乙醇18%（w/w）/磷酸氢二钾20%（w/w）体系放大实验,0.01-73L规模的平均回收率为100.4%,菌体的平均去除率达到99%。同时该双水相体系能够有效去除发酵液中的部分杂蛋白,还可以去除87.2%的多糖,并使上相的蛋白酶A活性降低了24.4%,部分抑制了蛋白酶B的活性,提高了重组人血清白蛋白的稳定性。双水相萃取将固液分离、萃取、浓缩、初级纯化整合为一步进行。通过研究成相物质的回收,上相中的乙醇和下相中的磷酸氢二钾回收率均在80%以上。其次,根据双水相上相的特点,建立了与之相适应的纯化方法：包括减压蒸馏去除乙醇、Phenyl SepharoseTM疏水层析纯化、DEAE阴离子交换层析去除多聚体等步骤。其中向平衡液中添加含1.2mol/L的磷酸氢二钾,为疏水层析的最优条件,此时收率为74.94%,还原SDS-PAGE电泳结果表明纯化的重组人血清白蛋白达到了电泳纯。而且纯化的重组人血清白蛋白能够长期保存,其中蛋白酶A活性降至上清液的9.18%,蛋白酶B可能被去除。最后,对上述方法分离纯化得到的重组人血清白蛋白纯度、杂质含量、二级结构及分子量进行了分析。高效液相色谱检测其纯度达到了99.77%,色素比值A350/A280为0.028。同时,其多糖含量为2.98μg/mg,蛋白酶A活性降为上清液的2.93%。而且,纯化的重组人血清白蛋白分子量及二级结构与血源白蛋白具有一致性。双水相萃取耦合柱层析技术提供了一种简便的、分离纯化得到高纯度重组人血清白蛋白的方法,具有分离时间短、收率高、杂质去除效果好的优点,具有产业化的前景。
韩健,李文娟,施志仪,郝莹莹,靳雨丽[2]（2010）在《三角帆蚌Nacrein基因克隆、蛋白提纯及其对珍珠晶体成型的影响》文中指出为研究三角帆蚌Nacrein蛋白对珍珠晶体成型的影响,通过巢式及3′-RACE PCR对三角帆蚌基质蛋白Nacrein基因3′端序列进行克隆,得到850bp碱基片段,分析表明其与合浦珠母贝同源基因序列相似度为56%,与马氏珠母贝相似度为50%。试验通过水提法初步分离出珍珠质水溶性基质蛋白,并采用快速蛋白液相色谱（fast protein liquid chromatography,FPLC）分离出分子量约为60kD的Nacrein蛋白。此外,采用配对试验设计,对试验组外套膜组织培养样品加入Nacrein蛋白,研究Nacrein蛋白对晶体成型的影响,结果显示,加入Nacrein蛋白的试验组结晶成棱形状;而未加Nacrein蛋白的对照组结晶成雪花状,而且在晶体形成的时间上,试验组也较之对照组要早。研究表明,Nacrein蛋白能加速外套膜组织分泌的钙质形成棱状结晶,从而对晶体成型产生影响。本研究为进一步研究基质蛋白对生物矿化的作用提供试验依据,对珍珠培育生产有一定指导意义。
钦晓峰,蔡刚明,周杏琴,周尧远,蒋孟军,谭成,张荣军[3]（2004）在《HiTrapQ柱FPLC快速纯化人血清白蛋白（HSA）》文中研究表明为研制新型三、四天线半乳糖肝受体功能显像剂,须将三、四天线半乳糖与人血清白蛋白（HSA）偶联,故必须制备较纯净人血清白蛋白（HSA）。在FPLC上用HiTrapQ柱快速纯化人血清白蛋白（HSA）。经PAGE和SDS-PAGE鉴定只有一条带。在FPLC上用HiTrapQ柱纯化HSA有速度快、纯化量大且方法较为简便等特点。
张荣军,梁高林,万卫星,蔡刚明,叶万忠,陶永辉,张莲芬,谭成,金坚[4]（2000）在《肝ASGP受体功能显像剂的制备及显像研究》文中提出采用ＦＰＬＣ快速纯化人血清白蛋白，利用双功能试剂２－亚胺基－２－甲氧基乙基－１－疏代－ 半乳糖甙与伯胺基的成脒反应，将硫代半乳糖残基引入人血清白蛋白分子，得到平均糖密度为 ３０的新半乳糖人血清白蛋白（ＮＧＡ）；用直接法制备９９ｍＴｃ－ＮＧＡ，其放化纯大于９０％，且室温下 可稳定６ｈ以上，符合显像要求。９９ｍＴｃ－ＮＧＡ小鼠体内分布实验及大鼠、兔和狗的显像研究均 表明９９ｍＴｃ－ＮＧＡ能够被肝脏特异摄取，且具有饱和性，主要通过胆道、肠道排泄，是一种较 好的肝ＡＳＧＰ受体功能显像剂。
二、HiTrapQ柱FPLC快速纯化人血清白蛋白(HSA)（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、HiTrapQ柱FPLC快速纯化人血清白蛋白(HSA)（论文提纲范文）
（1）双水相萃取偶联柱层析分离纯化重组白蛋白（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 人血清白蛋白简介 |
| 1.1.1 人血清白蛋白结构及体内合成过程 |
| 1.1.2 人血清白蛋白的生理功能 |
| 1.1.3 人血清白蛋白的应用 |
| 1.1.4 人血清白蛋白的市场 |
| 1.1.5 人血清白蛋白来源 |
| 1.1.6 血源白蛋白的提取 |
| 1.2 重组人血清白蛋白 |
| 1.2.1 重组人血清白蛋白的表达系统 |
| 1.2.2 国内外重组人血清白蛋白的开发 |
| 1.2.3 重组人血清白蛋白的分离纯化 |
| 1.3 毕赤酵母发酵生产重组人血清白蛋白 |
| 1.3.1 毕赤酵母发酵液的特点 |
| 1.3.2 毕赤酵母蛋白酶 |
| 1.4 双水相萃取技术 |
| 1.4.1 传统双水相萃取技术 |
| 1.4.2 亲水性有机溶剂/无机盐双水相萃取技术 |
| 1.4.3 双水相萃取的特点 |
| 1.4.4 亲水性有机溶剂/无机盐双水相萃取技术的应用 |
| 1.5 疏水层析 |
| 1.5.1 疏水层析原理 |
| 1.5.2 疏水层析分离过程 |
| 1.5.3 疏水层析缓冲液中盐的选择 |
| 1.5.4 疏水层析介质 |
| 1.5.5 纯化策略中的疏水层析 |
| 1.6 本课题的研究内容及意义 |
| 1.6.1 本课题的研究内容 |
| 1.6.2 本课题的研究方案 |
| 1.6.3 本课题的研究意义 |
| 2 重组人血清白蛋白在亲水性有机溶剂/无机盐双水相体系中的分配规律 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 发酵上清液的制备 |
| 2.3.2 不同双水相体系萃取能力测定 |
| 2.3.3 亲水性有机溶剂/无机盐双水相体系相图的绘制 |
| 2.3.4 重组人血清白蛋白在双水相体系中分配行为的研究 |
| 2.3.5 分析方法 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 不同双水相体系萃取能力测定 |
| 2.4.2 乙醇/磷酸氢二钾双水相体系相图的绘制 |
| 2.4.3 重组人血清白蛋白在磷酸氢二钾/乙醇双水相体系中的分配规律 |
| 2.5 本章小结 |
| 3 双水相萃取发酵液中重组人血清白蛋白的研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 乙醇/磷酸氢二钾体系萃取分离发酵液中的重组人血清白蛋白 |
| 3.3.2 乙醇/磷酸氢二钾双水相萃取对发酵液中杂质的去除效果 |
| 3.3.3 重组人血清白蛋白在双水相上相中稳定性分析 |
| 3.3.4 双水相上相中蛋白酶性质分析及活性测定 |
| 3.3.5 双水相体系中盐回收方法的研究 |
| 3.3.6 分析方法 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 乙醇/磷酸氢二钾双水相萃取发酵液中重组人血清白蛋白条件研究 |
| 3.4.2 乙醇/磷酸氢二钾双水相萃取对发酵液中杂质的去除 |
| 3.4.3 双水相萃取对发酵液中蛋白酶的去除作用 |
| 3.4.4 乙醇/磷酸氢二钾体系中盐回收方法的研究 |
| 3.5 本章小结 |
| 4 重组人血清白蛋白纯化方法研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料与仪器 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 减压蒸馏回收乙醇 |
| 4.3.2 添加不同种类盐的疏水层析 |
| 4.3.3 添加不同盐疏水层析后的重组人血清白蛋白稳定性 |
| 4.3.4 添加不同盐的疏水层析,得到重组人血清白蛋白中的蛋白酶分析 |
| 4.3.5 添加磷酸氢二钾的疏水层析对杂质的去除效果 |
| 4.3.6 pH对添加磷酸氢二钾疏水层析的影响 |
| 4.3.7 DEAE阴离子层析条件的优化 |
| 4.3.8 分析方法 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 减压蒸馏后乙醇含量 |
| 4.4.2 添加盐种类和浓度对疏水层析收率的影响 |
| 4.4.3 添加盐种类和浓度对疏水层析后重组人血清白蛋白纯度的影响 |
| 4.4.4 添加不同盐疏水层析后的重组人血清白蛋白稳定性 |
| 4.4.5 添加不同盐疏水层析,得到的重组人血清白蛋白中蛋白酶分析 |
| 4.4.6 pH对添加磷酸氢二钾疏水层析的影响 |
| 4.4.7 添加磷酸氢二钾疏水层析对多糖、色素的去除效果 |
| 4.4.8 DEAE阴离子层析条件优化 |
| 4.4.9 DEAE阴离子层析对多糖及色素的去除效果 |
| 4.5 本章小结 |
| 5 重组人血清白蛋白鉴定分析 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验材料与仪器 |
| 5.2.1 实验材料 |
| 5.2.2 实验仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 纯化方法各步对多糖、色素及蛋白酶A的去除效果 |
| 5.3.2 重组人血清白蛋白鉴定分析 |
| 5.3.3 分析方法 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 纯化过程各步重组人血清白蛋白收率及杂质含量 |
| 5.4.2 色素水平测定 |
| 5.4.3 HPLC分析重组人血清白蛋白纯度 |
| 5.4.4 质谱测定重组人血清白蛋白分子量 |
| 5.4.5 圆二色光谱分析重组人血清白蛋白二级结构 |
| 5.5 本章小结 |
| 结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 |
| 致谢 |
（2）三角帆蚌Nacrein基因克隆、蛋白提纯及其对珍珠晶体成型的影响（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 外套膜基质蛋白Nacrein蛋白3′端克隆及分析 |
| 1.3 珍珠层水溶性基质蛋白提取、SDS鉴定及Nacrein蛋白分离 |
| 1.3.1 水提法[5]初步分离水溶性基质蛋白 |
| 1.3.2 FPLC [6]分离纯化Nacrein蛋白 |
| 1.3.3 SDS-PAGE凝胶电泳鉴定纯化后蛋白[7] |
| 1.4 外套膜组织培养与钙结晶观察 |
| 1.4.1 三角帆蚌外套膜组织培养[8] |
| 1.4.2 钙结晶结果观测 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 Nacrein基因的序列的克隆与分析 |
| 2.2 FPLC分离纯化Nacrein蛋白 |
| 2.2.1 基质蛋白的回收率及Nacrein蛋白的纯度 |
| 2.2.2 Nacrein蛋白的纯度 |
| 2.3 Nacrein蛋白对三角帆蚌外套膜组织培养钙结晶观测与分析[10] |
| 3 讨论 |
（3）HiTrapQ柱FPLC快速纯化人血清白蛋白（HSA）（论文提纲范文）
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 仪器与试药 |
| 2.2 HSA的纯化 |
| 2.2.1 样品的处理 |
| 2.2.2 HiTrap Q柱的处理 |
| 2.2.3 HSA的纯化 |
| 2.3 HSA的纯化效果 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 结果 |
| 3.1.1 HSA的得率 |
| 3.1.2 HSA的纯度 |
| 3.2 讨论 |
四、HiTrapQ柱FPLC快速纯化人血清白蛋白(HSA)（论文参考文献）
- [1]双水相萃取偶联柱层析分离纯化重组白蛋白[D]. 张帆. 大连理工大学, 2011(09)
- [2]三角帆蚌Nacrein基因克隆、蛋白提纯及其对珍珠晶体成型的影响[J]. 韩健,李文娟,施志仪,郝莹莹,靳雨丽. 生物技术通报, 2010(12)
- [3]HiTrapQ柱FPLC快速纯化人血清白蛋白（HSA）[J]. 钦晓峰,蔡刚明,周杏琴,周尧远,蒋孟军,谭成,张荣军. 生命科学仪器, 2004(06)
- [4]肝ASGP受体功能显像剂的制备及显像研究[J]. 张荣军,梁高林,万卫星,蔡刚明,叶万忠,陶永辉,张莲芬,谭成,金坚. 核技术, 2000(11)