一、胰岛素样生长因子-Ⅰ和胰岛素样生长因子结合蛋白-1与妊高征的关系（论文文献综述）
郭少峰,贾君芳,王瑞萍[1]（2021）在《胎盘IGF-Ⅱ、IGFBP-1表达与妊高征围生儿不良结局的关系》文中认为目的检测妊高征患者胎盘组织中胰岛素样生长因子-Ⅱ（insulin-like growth factor-Ⅱ,IGF-Ⅱ）、胰岛素样生长因子结合蛋白-1（insulin-like growth factor binding protein-1,IGFBP-1）的表达水平,并分析其与围生儿不良结局的关系。方法取126例妊高征患者（妊娠高血压48例、轻度子痫前期44例、重度子痫前期34例,分别记为A组、B组和C组）和40例正常孕产妇（记为对照组）的胎盘组织检测IGF-Ⅱ、IGFBP-1的表达。结果 A组、B组、C组胎盘组织IGF-Ⅱ阳性表达率均低于对照组,B组和C组均低于A组,C组低于B组,胎盘组织IGFBP-1阳性表达率、围生儿不良结局发生率变化趋势相反,分别两两比较差异均有统计学意义（P<α）;妊高征患者围生儿不良结局发生率为22.22%,且母亲高龄产妇、母亲确诊孕周>32周、母亲重度病情、母亲疾病进展、母亲治疗不依从、胎盘组织IGFBP-1阳性表达均为其危险因素,胎盘组织IGF-Ⅱ阳性表达是其保护因素。结论妊高征患者胎盘组织IGF-Ⅱ阳性表达率低,而IGFBP-1阳性表达率高,二者与疾病类型、病情程度、围生儿不良结局均有密切关联。
杨光[2]（2021）在《稳定性冠心病痰瘀互结证与血瘀证的DIA定量蛋白质组学研究》文中指出背景稳定性冠心病是常见的慢性非传染性疾病,威胁着患者的生活质量和远期预后。目前,稳定性冠心病的管理以生活方式干预,强化药物治疗和减少危险因素为主。但即使经过有效管理,有些患者仍会出现心肌缺血症状。经皮冠状动脉介入治疗可降低心绞痛的发作次数,但会引起5%至10%的再狭窄风险,且难以改善心血管远期预后。以上问题表明,冠心病需要开发新的个体化治疗策略,来改善疗效和预后。中医药治疗通过个体化施治,在防治冠心病、改善患者生活质量方面具有独特优势。痰瘀互结证与血瘀证是冠心病最常见的中医证型,既往关于痰瘀互结证与血瘀证的生物学基础研究取得了阶段性成果,但也存在一些问题,如无法特异性地区分证候差异等。蛋白质组学与中医证候具有某些相似之处,两者都是机体即时功能状态的反映,研究蛋白质组学相当于从表层原因层面探究证候的微观物质基础。有鉴于此,本研究借助定量蛋白质组学技术和生物信息学方法,初步筛选冠心病痰瘀互结证与血瘀证的血浆蛋白质表达谱及两种证候间的蛋白质差异,希望明确冠心病痰瘀互结证与血瘀证的关键生物学过程,从而为中医证候的客观化研究与冠心病的个体化治疗提供依据。目的初步筛选冠心病痰瘀互结证与血瘀证的血浆蛋白质表达谱及两种证候间的蛋白质差异,希望明确冠心病痰瘀互结证与血瘀证生物学过程中的核心靶点和通路,为中医证候的客观化研究提供依据。方法1.基于DIA的冠心病痰瘀互结证与血瘀证的蛋白质测序。参照《稳定性冠心病诊断与治疗指南》、《冠心病心绞痛证候要素诊断标准》,共纳入研究对象15例,分为冠心病痰瘀互结证组、冠心病血瘀证组与健康对照组。在获取受试者的知情同意后,于清晨采集研究对象的空腹血浆,进行离心,获得蛋白质混合液。经过蛋白质提取、酶解、除盐后进行液相色谱分离及质谱鉴定。采用DIA扫描模式,将扫描区间内所有的肽段母离子经过超高速扫描并进行二级碎裂,使用二级碎片离子进行蛋白相对/绝对定量,从而获得完整的肽段信息。使用Spectronaut Pulsar软件进行搜库与鉴定,得到蛋白质的原始定量数据。对原始数据进行预处理后,在Excel中进行统计分析,利用差异倍数及p.value筛选不同组之间差异蛋白质。并通过R语言的Ggplot2包绘制火山图进行可视化展示。2.冠心病痰瘀互结证与血瘀证的差异蛋白质功能分析。根据第一部分的差异蛋白质结果进行生物信息学分析:①GO富集分析:利用David数据库分析各组间差异蛋白质对应基因的富集情况,选取富集基因数在3以上的条目进行展示,利用R语言GOplot包绘制弦图。②KEGG信号通路查询:利用KEGG Mapper查询GO分析中已经富集到的差异基因,将Uniprot ID输入KEGG Mapper查询相关信号通路图,选取富集基因数在3以上的信号通路图进行展示。③蛋白质互作网络分析:利用String数据库检索差异蛋白质的互作网络,利用Cytoscape软件优化蛋白质互作网络,并通过计算节点数量得到核心蛋白质。结果1.在差异倍数为1.5倍时,冠心病痰瘀互结证组相比于健康对照组,共鉴定到19个蛋白质下调,9个蛋白质上调。上调的蛋白质包括:免疫球蛋白轻链可变区3D-15、免疫球蛋白重链可变区3-43、血管性血友病因子、过氧化物酶Peroxiredoxin-2、免疫球蛋白重链可变区 6-1、Mannosyl-oligosaccharide 1,2-alpha-mannosidase IA、免疫球蛋白重链可变区1-45、免疫球蛋白重链可变区3-9、S100A9蛋白。下调的蛋白质包括:胰岛素样生长因子1受体、血小板糖蛋白α链、免疫球蛋白重链可变区1-69、免疫球蛋白轻链κ型1-8、二肽基肽酶-Ⅳ、白蛋白、血浆丝氨酸蛋白酶抑制剂、补体因子H相关蛋白2、胰岛素生长因子结合蛋白3、载脂蛋白C-I、转铁蛋白受体1、胰岛素样生长因子结合蛋白复合物亚基、补体因子H相关蛋白4、细胞外基质蛋白1、补体因子H相关蛋白1、转化生长因子β、L选择素、补体因子H、胰岛素样生长因子2。冠心病血瘀证组相比于健康对照组,共鉴定到22个蛋白质下调,9个蛋白质上调。上调的蛋白质包括:免疫球蛋白轻链λ型可变区3-25、免疫球蛋白重链可变区3-23、免疫球蛋白重链可变区3-43、免疫球蛋白重链的恒定区域、免疫球蛋白重链可变区3-49、C反应蛋白、免疫球蛋白轻链λ型可变区6-57、免疫球蛋白重链可变区3-9、胰岛素样生长因子结合蛋白2。下调的蛋白质包括:免疫球蛋白轻链可变区1D-13、免疫球蛋白λ型多肽1、多聚蛋白2、Roundabout homolog 4、血浆丝氨酸蛋白酶抑制剂、胰岛素样生长因子结合蛋白复合物亚基、富含半胱氨酸酸性分泌蛋白类似蛋白1、胰岛素样生长因子结合蛋白3、多泡体亚单位12B、白蛋白、L选择素、补体因子H、补体因子H相关蛋白1、血小板糖蛋白α链、含Ⅰ型血小板结合蛋白序列的解聚素样金属蛋白酶2、细胞间黏附分子2、细胞间黏附分子2、凝溶胶蛋白、载脂蛋白L1、维生素D结合蛋白、细胞外基质蛋白1、磷脂转运蛋白。冠心病痰瘀互结证组相比于血瘀证组,共鉴定到8个蛋白质下调,6个蛋白质上调。上调的蛋白质包括:IgG的Fc片段受体、Mannosyl-oligosaccharide 1,2-alpha-mannosidase IA、桥粒芯蛋白2、S100A9蛋白、结合珠蛋白相关蛋白、多聚蛋白2;下调的蛋白质包括:二肽基肽酶-Ⅳ、血小板反应蛋白1、免疫球蛋白轻链κ型3-7、胰岛素样生长因子结合蛋白2、血小板因子4、免疫球蛋白重链可变区3-49、免疫球蛋白轻链κ型2-40、氨肽酶N。2.①冠心病血瘀证的关键生物学过程是补体参与的慢性炎症反应,关键信号通路是补体与凝血级联反应的通路,核心靶点是血管性血友病因子和补体因子H。②冠心病痰瘀互结证的核心生物学过程是血小板过度激活与细胞蛋白质代谢异常,其关键信号通路是补体与凝血级联反应的信号通路,生长激素的合成、分泌和作用信号通路,其核心靶点是血管性血友病因子、补体因子H、胰岛素样生长因子1、胰岛素样生长因子2、胰岛素样生长因子结合蛋白3。③冠心病痰瘀互结证和血瘀证表型差异的生物学基础和相关分子靶点尚不明确,可能与炎症和免疫反应有关。结论1.冠心病血瘀证的生物学过程与补体参与的慢性炎症反应有关,补体与凝血级联反应是关键信号通路,补体因子H和血管性血友病因子是核心靶点;2.冠心病痰瘀互结证的生物学过程与血小板过度激活和蛋白质代谢异常有关,补体与凝血级联反应亢进,生长激素的合成、分泌和作用减弱。血管性血友病因子、补体因子H、胰岛素样生长因子1等是其核心靶点;3.冠心病痰瘀互结证和血瘀证的生物学基础比较接近,“痰浊”可能带来更强的免疫炎症反应,或导致“正气减弱”。
高文仓,张月蒙[3]（2021）在《胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1基因甲基化检测联合粪便潜血定量试验在结直肠癌中的诊断价值》文中指出目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1（IGFBP-rP1）基因甲基化检测联合粪便潜血定量试验对结直肠癌的诊断价值。方法选取2017年1月至2020年12月浙江中医药大学附属第二医院住院治疗的92例结直肠癌患者（结直肠癌组）,另选取同期于本院体检的50例健康志愿者（对照组）。比较2组IGFBP-rP1基因甲基化状态,以及不同性别、年龄、肿瘤位置、分化程度受试者IGFBP-rP1基因甲基化状态。比较2组粪便潜血定量水平。分析IGFBP-rP1基因甲基化状态和粪便潜血定量水平对结直肠癌的诊断价值。结果结直肠癌组IGFBP-rP1基因甲基化比例明显低于对照组[50.0%（46/92）比84.0%（42/50）],差异有统计学意义（P <0.001）。不同性别、年龄、肿瘤部位、分化程度的受试者IGFBP-rP1基因甲基化比例比较,差异均无统计学意义（均P> 0.05）。结直肠癌组粪便潜血定量水平明显高于对照组[（2 377±903）μg/L比（1 496±254）μg/L],差异有统计学意义（P <0.001）。二元Logistic回归分析结果显示,IGFBP-rP1基因甲基化是结直肠癌发生的独立保护因素,粪便潜血定量水平升高是独立危险因素（均P <0.05）。受试者工作特征曲线分析结果显示,IGFBP-rP1基因甲基化状态和粪便潜血定量水平预测结直肠癌发生的曲线下面积（AUC）分别为0.791（95%置信区间:0.705～0.877）、0.769（95%置信区间:0.691～0.847）,二者联合检测的AUC为0.903（95%置信区间:0.855～0.952）,高于单独检测。结论 IGFBP-rP1基因甲基化是结直肠癌发生的独立保护因素,粪便潜血定量水平升高是独立危险因素,二者联合检测可提高对结直肠癌的早期诊断价值。
赵畅[4]（2021）在《能量负平衡奶牛产后乏情的关键蛋白筛选及作用机制研究》文中研究指明奶牛产后能量负平衡（NEB）会抑制卵泡发育,使得乏情率升高。尽管集约化牛场应用同期发情定时输精技术（TAI）来提高奶牛发情率,但仍有部分NEB奶牛产后经TAI处理后无优势卵泡供机体选择排卵,出现乏情表现。目前,高产奶牛产后NEB所致的乏情率升高已成为制约奶牛繁殖效率的一大瓶颈。为此,本研究针对这一问题,通过NEB乏情奶牛血清、卵泡液和卵巢皮质组织的蛋白质组学分析的体内实验,结合ADPN对低糖培养奶牛体外颗粒细胞（GCs）生长发育和类固醇激素合成的影响的体外实验,阐明NEB奶牛产后乏情蛋白质组学变化特征,明确所筛选的差异蛋白如脂联素（ADPN）与奶牛产后乏情的关系及其对奶牛乏情发生的风险预警作用,以及ADPN影响奶牛产后乏情和体外GCs生长发育的分子机制,为今后研究奶牛产后NEB导致乏情的机制提供理论依据。1.体内实验。为了明确奶牛产后乏情蛋白组学特征谱以及差异蛋白的作用,本实验在奶牛产后14-21 d根据血清中β-羟丁酸（BHBA）浓度高于1.20 mmol/L,同时葡萄糖（Glu）浓度低于2.80 mmol/L,被分成能量负平衡组（NEB,n=30）和能量平衡组（PEB,n=30）,跟踪至产后55-60 d;在产后50-55d根据是否发情及卵泡直径大小选择NEB组乏情奶牛（NEB-A,n=6,卵泡直径<8 mm）和PEB组发情奶牛（PEB-E,n=6,优势卵泡直径在15-20 mm之间）进行屠宰采集样品,开展了系列实验,结果如下:（1）应用TMT/LC-MS/MS蛋白组学技术筛选NEB-A和PEB-E奶牛血清、卵泡液和卵巢皮质组织的差异表达蛋白（DEP）,分析DEP功能和富集通路等。与PEB-E组相比,NEB-A组奶牛血清中DEP有82个下调,78个上调,主要富集通路包括:补体和凝血系统、P13K-AKT通路、胰高血糖素信号通路、MAPK通路等;NEB-A组奶牛卵泡液中DEP有135种下调,37种上调,主要富集通路包括:脂质代谢、IGF调节系统、免疫系统等;NEB-A组奶牛卵巢皮质组织中DEP有88个下调,70个上调,主要富集通路包括:类固醇激素代谢、脂肪酸代谢、免疫系统等。（2）应用Western blot验证筛选的5种DEP,即超氧化物歧化酶（SOD）、视黄醇结合蛋白4（RBP4）、胰岛素样生长因子2（IGF2）、ADPN、和C反应蛋白（CRP）在卵泡液和血液中的表达水平,与组学结果一致。同时,验证试验奶牛卵巢皮质组织中AKT和ERK1/2磷酸化水平,与PEB-E组相比,AKT和ERK1/2在NEB-A组奶牛卵巢皮质组织的磷酸化水平显着下调（p<0.05）。（3）应用免疫组化对ADPN在卵巢组织中进行定位,与PEB-E组相比,NEB-A组奶牛ADPN在卵巢髓质下调,与血液、卵泡液和脂肪组织中的下调一致（p<0.05）,证实ADPN主要分布于卵巢髓质。（4）NEB和PEB奶牛血清中肝功指标、胰岛素调控相关指标及血清和卵泡液中ADPN和Glu,经生化分析、聚类分析、二元逻辑回归分析、风险指数分析和受试者工作特征曲线（ROC）分析发现,血清中ADPN与胰岛素调控和肝功指标呈强相关,卵泡液中Glu与ADPN呈正相关。并且,奶牛产后14-21 d血清中ADPN<2.365μg/m L可以用于奶牛产后乏情发生的风险预警。体内实验结果表明,奶牛产后经历NEB后血液、卵泡液及卵巢皮质组织中DEP主要通过富集通路影响奶牛产后发情,其中AKT和ERK1/2在奶牛卵巢皮质组织的磷酸化水平下调,以及血液、卵泡液和卵巢组织中ADPN的下调在奶牛产后乏情发生中起了重要的作用。2.体外实验。为了阐明低糖/ADPN在奶牛卵泡发育或GCs生长发育的作用,本实验在建立低糖培养体外牛GCs模型基础上,开展了系列实验,结果如下:（1）用Western blot检测低糖培养和正常培养下牛GCs细胞周期蛋白（CCNA1、CCND1、CCNE2、CDK1）、类固醇激素合成蛋白（St AR、HSD3B1）、ADPN蛋白受体（Adipo R2）的表达水平,与正常培养相比,低糖培养GCs细胞周期蛋白、类固醇激素合成蛋白、Adipo R2的表达水平都显着下调（p<0.05）。（2）在低糖培养下,添加低（0.1μg/m L）、中（0.5μg/m L）和高剂量（1μg/m L）的牛重组ADPN蛋白,仅添加蛋白包被溶剂为对照组。在处理12 h、24 h、48 h后,用CCK8、Western blot检测细胞活性、ADPN受体R2、细胞周期蛋白、类固醇激素合成蛋白的蛋白表达水平,用放射免疫方法检测培养基中E2和P4含量。与其他组相比,高剂量组48 h后细胞活性最高;与对照组相比,高剂量组St AR蛋白水平极显着升高（p<0.05）,三组HSD3B1蛋白水平极显着升高（p<0.01）;低剂量组GCs分泌E2能力无显着变化,高浓度ADPN显着增加E2合成能力;与对照组相比,不同剂量ADPN对GCs分泌P4无明显影响。（3）在低糖培养下,外源性添加LY294002（PI3K/AKT抑制剂）和高剂量ADPN,在处理12 h、24 h、48 h后,用Western blot检测AKT磷酸化水平以及CDK2、St AR、HSD3B1、Adipo R2的蛋白水平,用q-PCR检测CYP19A1、3β-HSD的基因表达水平,用放免法检测不同组中E2、P4含量。与对照组相比,添加ADPN+PI3K抑制剂组细胞活性显着下降（p<0.01）,CDK2蛋白水平极显着下降（p<0.01）,St AR和HSD3B1蛋白水平极显着下降（p<0.01）,培养基中P4含量无明显变化,但E2含量显着下降（p<0.05）。体外实验结果表明,高剂量ADPN经Adipo R2激活PI3K-AKT-CDK2通路刺激低糖环境下GCs类固醇激素E2的分泌,增强细胞活性,促进细胞生长发育。综上所述,本研究获得了奶牛产后乏情蛋白组谱,发现NEB通过补体和凝血系统、P13K-AKT通路、胰高血糖素信号通路、MAPK通路、脂肪酸代谢、免疫系统调控以及IGF调节系统等主要富集通路影响奶牛产后卵泡发育,确立了ADPN对NEB奶牛产后乏情发生的风险预警作用,证实了ADPN可以经Adipo R2-PI3K-AKT通路影响低糖培养下牛GCs活性和类固醇激素合成,进而调控卵泡生长发育。
郭艾[5]（2021）在《FGF19改善高脂诱导的肥胖对骨骼肌损害的作用与机制研究》文中指出目的:1.观察FGF19改善高脂诱导的肥胖所致的肌肉萎缩的作用。2.明确FGF19缓解高脂诱导的肥胖所致的脂糖代谢紊乱的作用。3.明确FGF19改善高脂诱导的肥胖所致的irisin表达降低的作用。4.探讨FGF19通过AMPK/SIRT-1/PGC-1α信号通路改善高脂诱导的肥胖对骨骼肌损害的作用机制。方法:1.动物实验:（1）5周与15月龄C57BL/6J雄性小鼠分别随机分为4组:对照组、对照+FGF19组、HFD组、HFD+FGF19组。HFD组与HFD+FGF19组采用高脂饲料（HFD）喂养构建肥胖以及肌少性肥胖小鼠模型,对照组与对照+FGF19组给予普通饮食喂养。喂养5个月后,HFD+FGF19组与对照+FGF19组小鼠分别给予腹腔注射FGF19（0.1mg/kg）每天注射一次,连续3周,对照组与HFD组给予等量生理盐水处理。（2）通过电子天平测量各组小鼠体重以及腓肠肌重量,电子抓力仪测量小鼠最大抓力,双能量X射线骨密度仪DXA检测小鼠体脂成分变化。（3）收集各组小鼠血液,进行葡萄糖耐量实验,并检测血糖、血脂、FGF19、irisin、胰岛素的表达情况。（4）H&E染色、透射电镜、油红O染色、免疫组化观察各组小鼠肌肉萎缩,脂质沉积以及FNDC-5蛋白表达情况。（5）Western blot检测肌肉萎缩（FOXO-3、Atrogin-1、Mu RF-1）、肌分化因子（MHC、Myo D、Myo G）,葡萄糖代谢（IRS-1、GLUT-4）、irisin前体分子FNDC-5以及信号通路相关分子（AMPK、SIRT-1、PGC-1α）相关分子指标的表达。2.细胞实验:（1）细胞分组:对照组、FGF19组（100ng/m L）、棕榈酸（PA）组（0.5m M）、FGF19+PA组（100ng/m L+0.5m M）。（2）Western blot检测各组肌肉萎缩、肌分化、葡萄糖代谢、irisin前体分子FNDC-5以及信号通路相关分子的蛋白表达。（3）ELISA检测培养上清中irisin水平。（4）免疫荧光、2-NBDG、油红O染色检测肌管萎缩、葡萄糖摄取、脂滴蓄积情况。（5）使用AMPK与SIRT-1抑制剂抑制AMPK与SIRT-1,小干扰RNA（PGC-1α-si RNA）抑制PGC-1α后,检测FGF19改善PA诱导的肌萎缩,脂糖代谢紊乱以及irisin表达情况。结果:1.动物实验:（1）通过HFD喂养青年与老年小鼠,构建肥胖与肌少性肥胖模型,发现HFD组小鼠体重较对照组增加,脂肪质量增加,而肌肉质量与抓力明显下降。HFD组小鼠的血糖、血脂、血胰岛素升高,糖耐量异常,血浆FGF19以及irisin表达水平下降。FGF19干预后可减轻小鼠体重,提高肌肉质量与抓力,恢复血糖血脂以及irisin等的表达水平,提示HFD所致的肥胖（包括肌少性肥胖）可出现肌肉质量与功能下降,脂糖代谢的紊乱以及肌分泌因子irisin的表达降低,而FGF19可能缓解肥胖与肌少性肥胖的发生发展。（2）H&E染色、透射电镜、油红O染色、免疫组化结果显示:HFD组小鼠的肌纤维直径较正常对照组缩小,肌纤维结构排列紊乱出现萎缩。腓肠肌可出现大量的脂滴蓄积,并且腓肠肌中FNDC-5的表达下降。FGF19干预后可一定程度上缓解肌纤维的萎缩,缓解脂滴蓄积,增加FNDC-5的表达,提示FGF19可缓解HFD诱导的肥胖所致的骨骼肌肌肉萎缩,脂质沉积,irisin表达降低。（3）Western blot结果显示:HFD组的腓肠肌中肌萎缩相关蛋白（FOXO-3、Atrogin-1、Mu RF-1）的表达较正常对照组升高,而肌分化蛋白（MHC、Myo D、Myo G）、葡萄糖摄取相关蛋白（IRS-1、GLUT-4）、irisin前体分子FNDC-5的表达较对照组下降。FGF19干预后可抑制肌萎缩蛋白升高,促进肌分化蛋白,葡萄糖摄取相关蛋白以及FNDC-5/irisin的表达,并且还可促进脂肪组织中能量代谢相关分子的表达,提示FGF19可缓解HFD诱导的肥胖所致的肌肉萎缩,脂糖代谢异常,FNDC-5/irisin表达下降。2.细胞实验:（1）Western blot结果显示:PA组中肌萎缩相关因子的蛋白表达水平较对照组上调,而肌分化蛋白,葡萄糖摄取因子以及FNDC-5的蛋白表达下降,FGF19的干预可缓解PA引起的上述相关因子的表达异常,提示FGF19在骨骼肌细胞中可缓解PA诱导的肌萎缩,糖代谢紊乱以及肌分泌因子的降低。（2）ELISA结果显示:FGF19组的细胞培养上清液中,irisin的表达增加,而PA组表达下降。FGF19可缓解PA引起的irisin表达下降。分析irisin表达与肌萎缩因子以及糖代谢因子的相关性发现,irisin与IRS-1、GLUT-4表达呈正相关,表明FGF19可能通过irisin自分泌促进肌肉葡萄糖代谢。（3）免疫荧光、2-NBDG以及油红O染色结果显示:通过MHC免疫荧光实验发现,PA可导致成肌细胞形成的肌管直径较对照组减小,肌管的融合指数也下降。通过2-NBDG葡萄糖摄取实验发现,PA可导致成肌细胞葡萄糖摄取下降。并且通过油红O染色发现,PA可导致脂滴在肌管明显的蓄积。FGF19可缓解PA所致的肌管萎缩,葡萄糖摄取异常以及脂滴蓄积。（4）通过AMPK和SIRT-1抑制剂以及si RNA沉默PGC-1α可抑制AMPK、SIRT-1、PGC-1α表达,导致FGF19无法缓解PA所致的肌萎缩因子表达上调,葡萄糖摄取因子以及FNDC-5的表达下降,提示FGF19可能通过AMPK/SIRT-1/PGC-1α信号通路发挥作用。结论:高脂诱导的肥胖可引起肌肉萎缩,导致肌肉质量与功能下降,并引起脂糖代谢紊乱,肌分泌因子irisin的表达降低。而FGF19可通过AMPK/SIRT-1/PGC-1α信号通路改善高脂引起的肌肉萎缩,脂糖代谢紊乱以及irisin的表达下降,进而缓解骨骼肌的质量和功能。因此,FGF19可能成为未来治疗肥胖与肌少性肥胖疾病的靶点。
王传玲[6]（2021）在《H3R117单ADP核糖基化调节IGFBP1甲基化影响大肠癌脂代谢机制研究》文中研究指明背景及目的大肠癌是世界重大公共健康问题,发病率居高不下。虽然目前已有手术、化疗、靶向治疗等方法,但治疗效果有限,大肠癌的死亡率仍然排名靠前,因此寻求新的治疗靶点迫在眉睫。随着研究进展,大肠癌表观遗传学改变受到关注。单ADP核糖基化是表观遗传的一种,但在大肠癌中的修饰水平及修饰靶蛋白尚不明确。本研究小组前期研究表明,催化单ADP核糖基化修饰催化酶ARTD8和ARTD14在大肠癌中表达较对照大肠组织显着增加,并且两者在大肠癌细胞胞核中都有表达,提示大肠癌细胞核内存在异常的单ADP核糖基化修饰;对大肠癌细胞系组蛋白单ADP核糖基化修饰进行高效液相串联质谱分析,发现LoVo细胞组蛋白H3第117位精氨酸（H3R117）存在单ADP核糖基化修饰;该位点修饰能抑制细胞凋亡,促进肿瘤细胞增殖、侵袭和转移等;在改变了H3第117位精氨酸单ADP核糖基化状态的LoVo细胞转录组分析中,发现其固醇调节元件结合转录因子1（SREBP1）和脂肪酸合成酶（FASN）基因表达降低,与脂代谢密切相关。越来越多的证据表明脂代谢紊乱与大肠癌有一定关系,可能在早期就参与大肠癌的发展,但具体机制还不明确。IGFBP1是调控IGF-1发挥作用的分子开关,且IGFBP1在大肠癌中水平较低。课题组前期研究结果亦显示,H3R117单ADP核糖基化修饰可调节DNA甲基化和组蛋白修饰,抑制抑癌基因表达,但是否影响IGFBP1甲基化还不清楚。本研究将在前期研究基础上,分析大肠癌细胞核单ADP核糖基化修饰水平,探索LoVo细胞H3R117单ADP核糖基化修饰是否调节IGFBP1启动子甲基化并影响细胞脂代谢,在大肠癌凋亡中发挥作用,为寻找大肠癌治疗潜在靶点提供新的思路及实验依据。方法本研究分为三部分:1、结直肠癌细胞核单ADP核糖基化水平的分析采用免疫组化方法检测64例大肠癌和对照大肠组织细胞核单ADP核糖基化修饰水平,并分析其与临床病理特征的关系。2、H3 R117单ADP核糖基化经IGFBP1对LoVo细胞脂代谢及凋亡的影响（1）H3 R117单ADP核糖基化对LoVo细胞脂代谢影响实验分为四组:选用课题组前期已成功构建的H3R117单ADP核糖基化修饰位点突变的大肠癌LoVo细胞（将组蛋白H3第117位精氨酸突变为丙氨酸和赖氨酸）为实验对象:突变组1（Mut-1）,即H3R117位点精氨酸突变为丙氨酸LoVo细胞,突变组2（Mut-2）,即H3R117位点精氨酸突变为赖氨酸LoVo细胞,观察H3R117单ADP核糖基化修饰的作用。空载组（empty vector）即转染空载体LoVo细胞和未经处理LoVo细胞（control）作为对照。1)ELISA检测细胞胆固醇和脂肪酸含量。2)ELISA检测细胞培养上清液IGF-1水平。3)Western Blot检测细胞IGFBP1、IGF-1R和SREBP1的表达水平。4)q RT-PCR检测细胞ACC、ACLY、FASN和HMGCR mRNA表达水平。（2）H3 R117单ADP核糖基化经IGFBP1对LoVo细胞凋亡影响采用小干扰RNA敲低IGFBP1基因。实验分为六组:未经处理LoVo细胞（control）;空载组（empty vector）;突变组1（Mut-1）,即H3R117位点精氨酸突变为丙氨酸LoVo细胞;突变组2（Mut-2）即H3R117位点精氨酸突变为赖氨酸LoVo细胞;突变组1+si-IGFBP1（Mut-1+si-IGFBP1）,即H3R117位点精氨酸突变为丙氨酸同时敲低IGFBP1基因LoVo细胞;突变组2+si-IGFBP1（Mut-2+si-IGFBP1）,即H3R117位点精氨酸突变为赖氨酸同时敲低IGFBP1基因LoVo细胞。1)在敲低IGFBP1后,采用ELISA检测LoVo细胞培养上清液IGF-1总体水平,采用Western Blot检测LoVo细胞IGFBP1的蛋白表达水平,采用q RT-PCR检测LoVo细胞IGF-1R、SREBP1、ACC、FASN和HMGCR mRNA表达水平。2)拉曼共聚焦显微镜检测敲低IGFBP1对细胞胆固醇的影响。3)Western Blot检测敲低IGFBP1对细胞膜脂筏、胞核和胞质IGF-1R表达的影响。4)Western Blot检测敲低IGFBP1对细胞Caspase3表达的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率。5)H3 R117单ADP核糖基化对移植瘤IGFBP1、IGF-1R、SREBP1和Caspase3表达的影响A.建立裸鼠皮下移植瘤模型,实验分为四组:未经处理LoVo细胞（control）,空载组（empty vector）,突变组1（Mut-1）即H3R117位点精氨酸突变为丙氨酸LoVo细胞,突变组2（Mut-2）即H3R117位点精氨酸突变为赖氨酸LoVo细胞。B.测量移植瘤瘤体最大径a和最小径b,按照V=ab2/2（cm3）计算皮下移植瘤体积。C.提取移植瘤组织蛋白,采用Western Bolt检测移植瘤组织IGFBP1、IGF-1R、SREBP1和Caspase3的表达。3、H3 R117单ADP核糖基化经IGFBP1影响LoVo细胞脂代谢及凋亡的机制研究（1）H3 R117单ADP核糖基化对IGFBP1启动子甲基化的影响实验分为四组:未经处理LoVo细胞（control）,空载组（empty vector）,突变组1（Mut-1）即H3R117位点精氨酸突变为丙氨酸LoVo细胞,突变组2（Mut-2）即H3R117位点精氨酸突变为赖氨酸LoVo细胞。1)采用Disease Meth version 2.0数据库分析大肠癌和对照大肠组织IGFBP1启动子甲基化水平。2)重亚硫酸盐测序法检测四组细胞IGFBP1启动子甲基化水平。3)ChIP检测H3R117单ADP核糖基化对IGFBP1基因启动子H3K9me2/3水平以及HP1α和DNMT1富集的影响。4)Western Bolt检测H3R117单ADP核糖基化对组蛋白瓜氨酸化H3cit表达的影响。5)Ch IP检测H3R117单ADP核糖基化对IGFBP1基因启动子H3cit水平的影响。（2）H3 R117单ADP核糖基化经H3cit对IGFBP1启动子甲基化的影响采用抑制剂Cl-amidine抑制组蛋白瓜氨酸化。实验分为六组:未经处理LoVo细胞（control）;空载组（empty vector）;突变组1（Mut-1）即H3R117位点精氨酸突变为丙氨酸LoVo细胞;突变组2（Mut-2）即H3R117位点精氨酸突变为赖氨酸LoVo细胞;突变组1+Cl-amidine（Mut-1+Cl-amidine）,即H3R117位点精氨酸突变为丙氨酸LoVo细胞同时加入抑制剂Cl-amidine;突变组2+Cl-amidine（Mut-2+Cl-amidine）,即H3R117位点精氨酸突变为赖氨酸LoVo细胞同时加入抑制剂Cl-amidine。1)CCK-8方法选取抑制剂Cl-amidine作用细胞的时间和浓度;Western Blot检测抑制剂Cl-amidine对H3cit和IGFBP1蛋白表达的影响。2)激光共聚焦显微镜观察加入抑制剂Cl-amidine后HP1α和DNMT1的共定位。3)甲基化DNA免疫共沉淀-实时定量PCR法检测加入抑制剂Cl-amidine对IGFBP1启动子甲基化水平的影响。结果1.结直肠癌细胞核单ADP核糖基化水平的分析（1）免疫组化结果显示,单ADP核糖基化在大肠癌和对照大肠组织中均有阳性染色,在大肠癌中的水平较对照大肠组织显着增加（p<0.05）,在细胞核中表达亦较对照大肠组织增加（p<0.05）。（2）对大肠癌的临床病理特征进行分析,结果显示,随着肿瘤浸润深度和肿瘤分级的增加,大肠癌细胞核中单ADP核糖基化水平逐渐增加,细胞核中单ADP核糖基化水平与浸润深度成正相关（p<0.05）,与肿瘤分级成正相关（p<0.05）,与性别、年龄、肿瘤位置、淋巴结转移和TNM分期无关（p>0.05）。2.H3 R117单ADP核糖基化经IGFBP1对LoVo细胞脂代谢及凋亡的影响（1）H3 R117单ADP核糖基化对LoVo细胞脂代谢影响1)ELISA检测细胞胆固醇和脂肪酸含量,结果显示,与对照组和空载组比较,突变1组和突变2组细胞的脂肪酸和胆固醇含量显着减少（p<0.05）。对照组和空载组比较、突变1组和突变2组比较均无统计学差异（p>0.05）。2)ELISA检测细胞培养上清液IGF-1水平,结果显示,与对照组和空载组比较,突变1组和突变2组细胞培养上清液IGF-1水平显着减少（p<0.05）。对照组和空载组比较、突变1组和突变2组比较均无统计学差异（p>0.05）。3)Western Blot检测细胞IGFBP1、IGF-1R和SREBP1的表达水平,结果显示,与对照组和空载组比较,突变1组和突变2组IGFBP1蛋白表达增加,IGF-1R、SREBP1蛋白表达降低（p<0.05）。对照组和空载组比较、突变1组和突变2组比较均无统计学差异（p>0.05）。4)qRT-PCR检测LoVo细胞脂肪酸和胆固醇合成限速酶ACLY、FASN、ACC和HMGCR的表达,结果显示,与对照组和空载组比较,突变1组和突变2组ACC、FASN和HMGCR mRNA表达降低（p<0.05）,ACLY无差异（p>0.05）。对照组和空载组比较、突变1组和突变2组比较均无统计学差异（p>0.05）。（2）H3 R117单ADP核糖基化经IGFBP1对LoVo细胞凋亡影响1)采用小干扰RNA敲低IGFBP1基因,选取si-IGFBP1-2为最优序列。ELISA检测敲低IGFBP1后细胞培养上清液IGF-1水平,结果显示,与突变1组和突变2组相比,突变1组+si-IGFBP1和突变2组+si-IGFBP1的细胞培养上清液IGF-1水平显着增加（p<0.05）。对照组和空载组间、突变1组和突变2组、突变1组+si-IGFBP1和突变2组+si-IGFBP1比较均无统计学差异（p>0.05）。2)Western Blot检测敲低IGFBP1后LoVo细胞IGFBP1的蛋白表达水平,结果显示,与突变1组和突变2组相比,突变1组+si-IGFBP1和突变2组+si-IGFBP1 IGFBP1蛋白表达降低（p<0.05）。对照组和空载组间、突变1组和突变2组、突变1组+si-IGFBP1和突变2组+si-IGFBP1比较均无统计学差异（p>0.05）。3)qRT-PCR检测敲低IGFBP1后细胞IGF-1R、SREBP1、ACC、FASN和HMGCR mRNA表达水平,结果显示,与突变1组和突变2组相比,突变1组+si-IGFBP1和突变2组+si-IGFBP1的IGF-1R、SREBP1、ACC、FASN和HMGCR的mRNA表达显着增加（p<0.05）。对照组和空载组比较、突变1组和突变2组、突变1组+si-IGFBP1和突变2组+si-IGFBP1比较均无统计学差异（p>0.05）。4)拉曼共聚焦显微镜检测敲低IGFBP1对细胞胆固醇的影响,结果显示,胆固醇标准品特征峰在1439cm-1处;与突变1组和突变2组相比,突变1组+si-IGFBP1和突变2组+si-IGFBP1的拉曼强度均显着增加（p<0.05）,细胞胆固醇含量增加。对照组和空载组间、突变1组和突变2组间、突变1+si-IGFBP1组和突变2+si-IGFBP1组间的拉曼强度没有统计学差异（p>0.05）。5)Western Blot检测敲低IGFBP1对细胞膜脂筏、胞核和胞质IGF-1R表达的影响,结果显示,与突变1组和突变2组相比,敲低IGFBP1后突变的两组细胞脂筏、细胞核和细胞质的IGF-1R均显着增加（p<0.05）。6)Western Blot检测敲低IGFBP1对细胞Caspase3表达的影响,结果显示,与突变1组和突变2组相比,突变1组+si-IGFBP1和突变2组+si-IGFBP1的Caspase3裂解减少（p<0.05）;敲低IGFBP1后,流式细胞术检测LoVo细胞的凋亡率,结果显示,与突变1组和突变2组相比,突变1组+si-IGFBP1和突变2组+si-IGFBP1的细胞凋亡率下降（p<0.05）。对照组和空载组间、突变1组和突变2组间、突变1+si-IGFBP1组和突变2+si-IGFBP1组间比较无统计学差异（p>0.05）。7)裸鼠皮下移植瘤构建成功,计算皮下移植瘤体积,结果显示,与对照组和空载组相比,突变1组和突变2组的皮下移植瘤体积显着减小（p<0.05）。Western Blot检测结果显示,与对照组和空载组相比,突变1组和突变2组的IGFBP1表达增加,IGF-1R和SREBP1蛋白表达降低,Caspase3裂解增加（p<0.05）。对照组和空载组间、突变1组和突变2组间比较无统计学差异（p>0.05）。3.H3 R117单ADP核糖基化经IGFBP1影响LoVo细胞脂代谢及凋亡的机制研究（1）H3 R117单ADP核糖基化对IGFBP1启动子甲基化的影响1)生物信息学分析大肠癌和对照大肠组织IGFBP1启动子甲基化水平,结果显示,大肠癌组织IGFBP1启动子甲基化水平较对照大肠组织显着增加（p<0.05）。2)重亚硫酸盐测序法检测IGFBP1启动子甲基化水平,结果显示,突变1组和突变2组细胞IGFBP1启动子甲基化水平较对照组和空载组显着降低（p<0.05）。对照和空载组、突变1组和突变2组之间无统计学意义（p>0.05）。3)Ch IP检测H3R117单ADP核糖基化对IGFBP1基因启动子H3K9me2/3水平以及HP1α和DNMT1富集的影响,结果显示,与对照组和空载组比较,突变1组和突变2组细胞IGFBP1启动子片断上H3K9me2修饰水平、HP1α和DNMT1的富集显着降低（p<0.05）,H3K9me3修饰水平无统计学差异（p>0.05）。对照和空载比较、突变1组和突变2组比较均无统计学意义（p>0.05）。4)Western Bolt检测H3R117单ADP核糖基化对组蛋白H3cit表达的影响,结果显示,与对照和空载组比较,突变1组和突变2组的H3cit表达显着增加（p<0.05）。对照和空载比较、突变1组和突变2组比较均无统计学意义（p>0.05）。5)ChIP检测H3R117单ADP核糖基化对IGFBP1基因启动子H3cit水平的影响,结果显示,与对照组和空载组比较,突变1组和突变2组细胞IGFBP1启动子片断上有更多的H3cit修饰（p<0.05）。对照和空载比较、突变1组和突变2组比较均无统计学意义（p>0.05）。（2）H3 R117单ADP核糖基化经H3cit对IGFBP1启动子甲基化的影响1)选取瓜氨酸化抑制剂Cl-amidine作用浓度200μM,作用时间48 h。Western Blot检测抑制剂Cl-amidine对H3cit和IGFBP1蛋白表达的影响,结果显示,与突变1组和突变2组相比,加入Cl-amidine后两组的H3cit和IGFBP1蛋白表达显着降低（p<0.05）。对照和空载组间、突变1组和突变2组间、突变1+Cl-amidine组和突变2+Cl-amidine组间均无统计学差异（p>0.05）。2)激光共聚焦显微镜观察加入抑制剂Cl-amidine后HP1α和DNMT1的共定位,结果显示,绿色荧光HP1α和红色荧光DNMT1共定位显示为橘黄色荧光,与未加Cl-amidine时相比,突变的两组细胞加入Cl-amidine后与HP1α共定位的DNMT1均增加。3)甲基化DNA免疫共沉淀-实时定量PCR法检测加入抑制剂Cl-amidine对IGFBP1启动子甲基化水平的影响,结果显示,与未加Cl-amidine时相比,突变的两组细胞加入Cl-amidine后IGFBP1启动子5m C的富集显着增加（p<0.05）,IGFBP1启动子甲基化水平增加。对照和空载组之间、突变1组和突变2组之间、突变1+Cl-amidine组和突变2+Cl-amidine组之间没有差别（p>0.05）。结论1.大肠癌细胞核内存在的单ADP核糖基化修饰与肿瘤侵袭深度和分级呈正相关,随着肿瘤细胞核内单ADP核糖基化修饰水平的增加,肿瘤浸润深度越深,分级越高。提示单ADP核糖基化修饰参与大肠癌的进展。2.大肠癌细胞组蛋白H3R117单ADP核糖基化修饰可上调IGFBP1启动子甲基化水平,并与启动子片段上H3cit修饰水平降低、H3K9me2修饰水平增加、以及HP1α和DNMT1的富集增加有关。大肠癌IGFBP1基因启动子的甲基化水平增加,可增加大肠癌胆固醇合成,抑制细胞凋亡,从而在大肠癌发展过程中发挥促进作用。本研究丰富了大肠癌表观遗传学的内容,为H3R117单ADP核糖基化修饰成为大肠癌的靶点提供了新的思路及一定的实验依据。
杨娇[7]（2021）在《IGFBP-3和GalNAc-T14对脑胶质瘤细胞增殖和周期的影响及其信号机制研究》文中研究指明目的:观察IGFBP-3和Ga1NAc-T14对脑胶质瘤细胞增殖和周期的影响并对其信号机制进行探讨。方法:1.收集河北医科大学附属第二医院神经外科脑胶质瘤组织和配对癌旁组织各108例。免疫组织化学染色检测脑胶质瘤组织与癌旁组织IGFB P-3蛋白表达,以及脑胶质瘤组织CyclinE蛋白表达;分析IGFBP-3与C yclinE蛋白表达的关系;分析IGFBP-3和CyclinE蛋白与脑胶质瘤患者生存率的关系。2.以脑胶质瘤U87MG和U251MG细胞作为研究对象,重组人IGFB P-3（rhIGFBP-3）处理细胞;转染IGFBP-3质粒,或共转染IGFBP-3和G alNAc-T14质粒,荧光显微镜观察荧光表达情况;MTT法检测检测各细胞增殖活力;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞周期变化;蛋白印记实验检测IGFBP-3、GalNAc-T14、CyclinE、CDK2、p-ERK1/2蛋白表达变化。结果:1.相较于癌旁组织,IGFBP-3在脑胶质瘤组织中表达升高（P<0.01）。与IGFBP-3表达未升高的脑胶质瘤组织相比,CyclinE在IGFBP-3表达升高的脑胶质瘤组织中表达上调（P<0.01）。脑胶质瘤组织中IGFBP-3与CyclinE 蛋白表达呈强正相关性（r=0.7353,P<0.01）。IGFBP-3或Cycl inE蛋白表达升高与较低的生存率有关（P<0.05）。2.rhIGFBP-3处理明显时间依赖性增加U87MG和U251MG细胞的增殖率（P<0.05）。rhIGFBP-3明显增强U87MG和U251MG细胞的克隆形成能力（P<0.05）。rhIGFBP-3处理48h明显降低U87MG和U251MG细胞G1期细胞比例,并同时明显增加S期细胞比例（P<0.01）。rhIGFBP-3处理可时间依赖性上调U87MG和U251MG细胞p-ERK1/2、CyclinE和CDK2蛋白表达（P<0.01）。转染IGFBP-3质粒的U87MG和U251MG细胞显示较强绿色荧光,IGFBP-3蛋白表达显着上调（P<0.05）。IGFBP-3过表达显着增强U87MG和U251MG细胞克隆形成能力。IGFBP-3过表达显着增强U87MG和U251MG细胞p-ERK1/2、CyclinE及CDK2蛋白表达。IGFBP-3过表达显着降低U87MG和U251MG细胞G1期细胞比例,增加S期细胞比例。3.共转染IGFBP-3和CalNAc-T14质粒的U87MG和U251MG细胞显示较强绿色和红色荧光,IGFBP-3和CalNAc-T14蛋白表达均显着上调。与过表达IGFBP-3相比,共同过表达IGFBP-3和CalNAc-T14后U87MG和U251MG细胞克隆形成能力显着降低;G1期细胞比例显着增加（P<0.01）,S期细胞比例明显降低;p-ERK1/2、CyclinE和CDK2蛋白表达显着下调。结论:1.IGFBP-3在脑胶质瘤组织中表达上调,与患者不良预后相关;CyclinE在IGFBP-3表达升高的脑胶质瘤组织中表达上调,与患者不良预后相关,且与IGFBP-3表达正相关。2.IGFBP-3能磷酸化激活ERK1/2并上调CyclinE和CDK2蛋白表达,从而促进脑胶质瘤U87MG和U251细胞G1/S期转化和增殖。3.GalNAc-T14 可抑制 IGFBP-3 诱导的 U87MG 和 U251 细胞p-ERK1/2、CyclinE和CDK2蛋白表达变化,从而抑制细胞G1/S期转化和增殖。
尹一童[8]（2021）在《Lnc00839通过miR-19-3p/IGF-1分子轴对阴道壁成纤维细胞COL-1分泌影响及其分子机制探究》文中提出目的:盆腔脏器脱垂（Pelvic organ prolapse,POP）指的是由于女性盆底支持组织力量薄弱,盆腔内脏器经由阴道脱出于体外的一组疾病。盆腔脏器脱垂的发生通常与盆底结构支持系统松弛息息相关。从分子生物学角度探寻该疾病的发病机制,从而实现对疾病的早期诊断及早期干预,可以延缓疾病进程,减轻患者的痛苦,具有较重要的临床意义。在针对人体多个系统的多项研究结果显示,IGF-1的表达与成纤维细胞胶原蛋白表达程度相关。因此,我们推测,IGF-1表达异常可能与盆腔脏器脱垂的发病存在相关性。根据生信学分析结果,我们预测Lnc00839与IGF-1可能存在靶向调控关系,从而影响盆底结构中成纤维细胞胶原蛋白的表达。本文拟探寻IGF-1与盆腔脏器脱垂之间的关系,并进一步研究Lnc00839在盆腔脏器脱垂这一疾病中发挥的作用,以寻找与盆腔脏器脱垂相关的分子生物学机制,为疾病的早期诊断及早期干预提供潜在解决方案。方法:1.利用PCR及Western-blot等方法,检测并比较脱垂组患者阴道壁组织中与正常对照组患者阴道壁组织中Lnc00839、mi R-19-3p、IGF-1,IGF-1R,COL-1,COL-3的表达情况,并与器官脱垂临床严重程度进行相关性分析。2.对脱垂组及对照组组织中凋亡及自噬情况进行分析:TUNEL检测两组间组织凋亡情况,Western-blot检测两组中自噬标记物Beclin1、LC3II/I及凋亡标记物Bax、Bcl-2的表达情况。3.上调IGF-1后,检测下游COL-1及LC3II/I表达情况,上调Lnc00839后,检测下游IGF-1及IGF-1R表达情况。4.实验验证Lnc00839与mi R-19-3p的靶向作用关系。5.实验验证mi R-19-3p与IGF-1的靶向作用关系。6.Western-blot检测脱垂组及对照组中AKT,m TOR,p70s6k,p-AKT,p-m TOR,p-p70s6k的表达情况。7.构建高转Lnc00839的成纤维细胞,并滴加不同浓度的IGF-1后,检测下游通路蛋白AKT,m TOR,p70s6k,p-AKT,p-m TOR,p-p70s6k的表达情况,同时检测下游COL-1,IGF-1和IGF-1R的表达情况及自噬标记物表达情况。结果:1.在POP患者的阴道壁组织中,Lnc00839,COL-1及IGF-1,IGF-1R表达水平降低,且其表达水平与盆腔脏器脱垂严重程度呈负相关,mi R-19-3p表达水平增高,其表达水平与脱垂严重程度呈正相关。2.POP患者的阴道壁组织中自噬水平和凋亡水平增加,IGF-1可以通过抑制细胞过度自噬水平,促进COL-1的分泌。3.上调IGF-1后,下游COL-1表达水平增加,Lnc00839可以上调阴道壁成纤维细胞IGF-1表达。4.Lnc00839可以与mi R-19-3p靶向结合。5.mi R-19-3p与IGF-1可以靶向结合,从而抑制Lnc00839对下游IGF-1及COL-1的上调作用。mi R-19-3p通过促进细胞凋亡与过度自噬调节成纤维细胞的COL-1表达。6.AKT-m TOR-p70s6k是IGF-1调控成纤维细胞COL-1分泌的通路。7.Lnc00839调控IGF-1表达最终也可以经过AKT-m TOR-p70s6k通路调控成纤维细胞自噬水平,从而调控成纤维细胞COL-1分泌。结论:1.Lnc00839在盆腔脏器脱垂的阴道壁组织中表达降低,且与盆腔脏器严重程度呈负相关。2.IGF-1与COL-1的低表达可能和盆腔脏器脱垂发病相关。3.Lnc00839可以正向调控IGF-1的表达。成纤维细胞的过度自噬和凋亡可能是盆腔脏器脱垂发生的病理生理基础。4.Lnc00839可能通过与mi R-19-3p相互作用靶向作用于IGF-1,调节成纤维细胞的自噬及凋亡水平,从而COL-1的表达水平。5.Lnc00839通过mi R-19-3p靶向作用于IGF-1后,通过AKT-m TOR-p70s6k通路作用于成纤维细胞,从而调节成纤维细胞COL-1的表达。
刘立朝[9]（2021）在《脂肪因子WISP1对妊娠期糖尿病胰岛素信号通路的作用机制研究》文中研究指明目的:妊娠期糖尿病（GDM）是指妊娠期间发生的糖代谢异常,但血糖水平尚未达到显性糖尿病的诊断标准。妊娠期间高血糖可以导致围产期母婴不良临床结局增加。GDM的发病机制包括胰岛素抵抗和胰岛素分泌相对不足。肥胖是GDM发生发展的一个重要的危险因素,慢性炎症反应在由母体肥胖导致的代谢紊乱发病过程中所起的作用越来越受到人们的重视。脂肪组织可以合成和分泌多种生物活性分子,这些分子统称为脂肪因子或脂肪细胞因子,对内分泌系统发挥调节作用。脂肪组织功能障碍可以导致机体慢性炎症反应和胰岛素抵抗的发生。Wnt诱导的分泌型蛋白1（WISP1）又被称为CCN4,是CCN家族的细胞外基质相关蛋白的成员,是经典Wnt信号通路活化后的下游靶基因之一,是最近鉴定的一个新的脂肪因子。在糖耐量异常的患者WISP1与机体的胰岛素抵抗和慢性炎症状态密切相关。本课题旨在研究WISP1在GDM妇女血清中的浓度及其在腹部皮下脂肪组织（SAT）和胎盘中的表达情况,分析其与妊娠期糖尿病患者肥胖、胰岛素抵抗以及慢性炎症之间的关系。此外,我们通过研究WISP1对脂多糖（LPS）诱导的3T3-L1脂肪细胞损伤的影响及其潜在的机制,进一步探讨WISP1在GDM发病过程中所起的作用。研究方法:第1部分:研究人群1:根据妊娠24-28周OGTT检测结果将受试者分为GDM组和正常糖耐量（NGT,对照）组。共采集140份血清样本,样本来自到中国医科大学附属盛京医院门诊定期随访的25周至30周的中国籍孕妇。测定其空腹血糖、空腹血清胰岛素、甲状腺功能、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）以及丙氨酸转氨酶（ALT）水平。计算稳态模型评估的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清样本WISP1和白介素-6（IL-6）的浓度;研究人群2:收集行剖腹产手术孕妇共52例,分为GDM组和Control组,择期手术时留取腹部SAT和胎盘组织样本,分别用q RT-PCR和Western blot方法检测皮下脂肪和胎盘组织WISP1的m RNA和蛋白的表达水平,免疫组化方法检测WISP1蛋白在组织中的定位。第2部分:制备WISP1过表达的慢病毒载体和WISP1 sh RNA干扰的慢病毒载体,分别对3T3-L1前脂肪细胞进行转染。用葡萄糖消耗实验观察脂肪细胞对葡萄糖的代谢情况,MTT法观察WISP1对脂肪细胞的增殖的影响。为研究WISP1在脂多糖（LPS）诱导的3T3-L1脂肪细胞导致的慢性炎症过程中所起的作用,我们用慢病毒瞬时转染处于对数生长期的3T3-L1脂肪细胞。转染成功后我们用浓度为10μg/m L的LPS处理各组脂肪细胞,分组情况如下:Control组、LPS组、GFP+LPS组、WISP1OE+LPS组、sh NC+LPS组和sh WISP1+LPS组。分别用凋亡检测试剂盒和western blot方法检测脂肪细胞的凋亡和测定凋亡相关蛋白,分别用ELISA和q RT-PCR方法测定炎症因子IL-6和TNF-α的浓度以及m RNA的表达,分别用q RT-PCR和Western blot方法检测PI3K/Akt信号通路关键因子的表达。结果:1、与对照组比较,GDM患者血清WISP1水平明显升高（P<0.01）。WISP1与体重指数（BMI）、空腹血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR和血清白介素-6（IL-6）呈显着正相关。BMI、空腹血糖和HOMA-IR可以作为正向预测血清WISP1的关键因素。GDM组患者在胎盘组织和脂肪组织WISP1 m RNA和蛋白表达水平显着高于对照组（P<0.01）。免疫组化提示WISP1蛋白在GDM组和对照组的胎盘组织以及腹部皮下脂肪组织中均有定位。2、与GFP组相比WISP1OE组3T3-L1脂肪细胞WISP1蛋白和m RNA的表达均显着升高（P<0.05）。MTT结果显示,与GFP组相比,WISP1OE组OD值增加。LPS组cleaved-caspase-3和bax表达上调（与对照组比较,P<0.05）,同时LPS组bcl-2水平（与对照组相比,P<0.05）下调,流式细胞术进一步证实LPS可以促进脂肪细胞凋亡。WISP1过表达可减少脂肪细胞凋亡,逆转LPS诱导的bcl-2、bax和cleavedcaspase-3的上述变化。WISP1基因敲除则与WISP1过表达的结果相反。WISP1过表达可以促进炎症因子IL-6和TNF-α的释放,LPS组和WISP1OE+LPS组IL-6和TNF-α水平高于对照组（LPS组vs对照组）和GFP+LPS组（WISP1OE+LPS组vs GFP+LPS组）（P<005）。而WISP1基因沉默可以导致IL-6和TNF-α表达水平降低,且sh WISP1组IL-6和TNF-α水平低于sh NC+LPS组（P<0.05）。磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）和蛋白激酶B（Akt）磷酸化水平在LPS组、WISP1OE+LPS组和sh NC+LPS组分别较对照组、GFP+LPS组和sh WISP1+LPS组升高（P<0.05）。而与对照组、GFP+LPS组和sh WISP1+LPS组相比,LPS组、WISP1OE+LPS组和sh NC+LPS组叉头框蛋白O3a（Fox O3a）核转位的蛋白表达降低（P<0.05）。相反,WISP1基因沉默可以抑制Akt的磷酸化并促进Fox O3a的核转位。应用Akt抑制剂LY294002后则可以逆转WISP1对脂肪细胞的保护作用。结论:1、本研究结果表明,GDM孕妇WISP1在血清、腹部SAT及胎盘组织表达均升高,提示WISP1可能参与了GDM的病理生理改变。2、在LPS诱导的脂肪细胞慢性炎症状态下,WISP1可通过调节PI3K/Akt信号通路减轻LPS诱导的3T3-L1脂肪细胞的损伤。我们的发现表明WISP1在GDM发病机制中可能发挥重要作用。
朱宇[10]（2020）在《质谱技术在多囊卵巢综合征子宫内膜生物标记物研究中的应用》文中研究表明研究目的:多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）是一种复杂的内分泌代谢疾病,具有排卵异常、不孕、妊娠并发症风险高等多种临床表现,致病机制尚不明确。子宫内膜与妊娠密切相关,本研究旨在利用质谱技术筛选PCOS子宫内膜潜在的生物标记物,并通过生物信息学分析,整合分子信息和细胞功能信息,为PCOS致病机制的研究提供线索。研究方法:以PCOS不孕患者子宫内膜活检组织为样本,以其他不孕患者子宫内膜活检组织为对照组,利用液相色谱-串联质谱技术（liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）进行蛋白质组学研究,筛选差异表达的蛋白分子,通过生物信息学分析,找到差异蛋白主要发挥作用的生物通路,从而解释其与PCOS疾病表现的相关性;利用基质辅助激光解吸电离质谱成像技术（matrix-assistedlaser desorption ionization mass spectrometry imaging,MALDI-MSI）进行小分子代谢物的研究,通过质谱成像获得各分子在组织切片上分布的谱图,直观显示各小分子发挥作用的位置信息和丰度信息。研究结果:在利用LC-MS/MS技术进行的蛋白质组学研究中,发现PCOS组存在431种差异表达蛋白,其中上调表达蛋白290种（FC≥2.0,P<0.05）,下调表达蛋白141种（FC≤0.5,P<0.05）。对差异蛋白进行KEGG富集分析,结果显示色氨酸代谢、酪氨酸代谢、核糖体生物发生、苯丙氨酸代谢、糖胺聚糖生物合成-硫酸角质素、甘氨酸丝氨酸和苏氨酸代谢、O-聚糖合成、视黄醇代谢、神经活性受体-配体相互作用等生物通路富集程度较为显着。对色氨酸代谢通路进行深入分析,发现包括2种上调蛋白（含黄素胺氧化酶A、含黄素胺氧化酶B）和2种下调蛋白（犬尿氨酸-3-单加氧酶、HCG23341蛋白）参与色氨酸-犬尿氨酸代谢途径,可能造成3-羟基-L-犬尿氨酸、L-犬尿氨酸及其下游代谢产物的浓度的变化。含黄素胺氧化酶A和含黄素胺氧化酶B还可作用于色氨酸-5-羟色胺代谢途径的产物血清素,催化其降解。对O-聚糖链合成过程进行深入分析,发现差异蛋白β-1,4-半乳糖基转移酶1参与O-岩藻糖链的生物合成,差异蛋白葡萄糖苷木糖基转移酶1和葡萄糖苷木糖基转移酶2参与O-葡萄糖链的生物合成。O-聚糖链合成异常可能影响相关蛋白的糖基化。在利用MALDI-MSI技术,在反射正离子模式下进行的小分子代谢物（50-1000 m/z）的研究中,各小分子成像结果清晰,在组织切片中分布较为均匀,没有聚集倾向,提示小分子代谢物发挥功能的位置较为分散,通过对实验结果初步分析,发现可能存在几种差异表达分子,需进一步实验验证。结论:1)PCOS子宫内膜存在43 1种差异表达的蛋白,可以作为目标分子,参与PCOS生物标记物和致病机理的研究;2)PCOS子宫内膜可能存在色氨酸代谢、O-聚糖链合成异常,并通过产生的下游产物,影响免疫反应、炎性反应、细胞增殖和蛋白糖基化等功能;3)PCOS子宫内膜可能存在小分子代谢物的改变,MALDI-MSI可作为一种技术手段应用于PCOS子宫内膜小分子代谢物标记物的研究。
二、胰岛素样生长因子-Ⅰ和胰岛素样生长因子结合蛋白-1与妊高征的关系（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、胰岛素样生长因子-Ⅰ和胰岛素样生长因子结合蛋白-1与妊高征的关系（论文提纲范文）
（1）胎盘IGF-Ⅱ、IGFBP-1表达与妊高征围生儿不良结局的关系（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 入选标准 |
| 1.2.1 纳入标准 |
| 1.2.2排除标准 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 治疗方法 |
| 1.3.2 胎盘组织IGF-Ⅱ、IGFBP-1表达检测 |
| 1.3.3 围生儿不良结局判断方法 |
| 1.3.4 胎盘组织中IGF-Ⅱ、IGFBP-1的表达与妊高征患者中围生儿不良结局的关系分析 |
| 1.4 观察指标 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组胎盘组织IGF-Ⅱ、IGFBP-1的阳性表达率对比 |
| 2.2 各组围生儿不良结局发生率对比 |
| 2.3 妊高征患者胎盘组织中IGF-Ⅱ、IGFBP-1的表达与围生儿不良结局的关系分析 |
| 2.4 胎盘组织IGF-Ⅱ、IGFBP-1免疫组化图片 |
| 3 讨论 |
（2）稳定性冠心病痰瘀互结证与血瘀证的DIA定量蛋白质组学研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 文献综述 |
| 综述一、蛋白质组学在冠心病领域的应用 |
| 1 蛋白质组学的技术体系概述 |
| 1.1 蛋白质的分离与鉴定 |
| 1.2 定性蛋白质组学与定量蛋白质组学 |
| 2 蛋白质组学在冠心病研究中的应用 |
| 2.1 冠心病的血液蛋白质组学研究 |
| 2.2 冠心病的尿液蛋白质组学研究 |
| 2.3 冠心病的组织蛋白质组学研究 |
| 参考文献 |
| 综述二、冠心病不同中医证候的蛋白质组学研究现状 |
| 1 血瘀证相关蛋白质 |
| 2 痰瘀互结证相关蛋白质 |
| 3 心气虚弱证与气虚血瘀证相关蛋白质 |
| 4 心肾阴虚证与肾虚血瘀证相关蛋白质 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 研究一、基于DIA的冠心病痰瘀互结证与血瘀证的蛋白质测序 |
| 1 样本量及来源 |
| 2 纳入及排除标准 |
| 2.1 病例纳入标准 |
| 2.2 病例排除标准 |
| 2.3 健康对照组纳入标准 |
| 3 知情同意 |
| 4 标本采集 |
| 5 实验材料 |
| 5.1 主要试剂与耗材 |
| 5.2 主要仪器 |
| 6 实验方法 |
| 6.1 蛋白质提取 |
| 6.2 测定蛋白浓度值 |
| 6.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 |
| 6.4 胰蛋白酶酶解 |
| 6.5 肽段除盐 |
| 6.6 LC-MS/MS高分辨质谱检测 |
| 6.7 数据解析 |
| 7 统计学分析 |
| 8.结果 |
| 8.1 一般情况 |
| 8.2 不同阈值的差异蛋白质表达统计 |
| 8.3 不同组的差异蛋白质统计结果 |
| 9 讨论 |
| 9.1 冠心病痰瘀互结证相关的蛋白质 |
| 9.2 冠心病血瘀证相关的蛋白质 |
| 9.3 冠心病痰瘀互结证与血瘀证的差异蛋白质 |
| 参考文献 |
| 研究二 冠心病痰瘀互结证与血瘀证的差异蛋白质功能分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 GO功能富集分析 |
| 1.2 KEGG信号通路图查询 |
| 1.3 蛋白质互作网络分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 基因GO功能富集分析 |
| 2.2 KEGG信号通路图查询 |
| 2.3 蛋白质互作网络分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 冠心病痰瘀互结证相关的关键通路和靶点 |
| 3.2 冠心病血瘀证相关的关键通路和靶点 |
| 3.3 冠心病痰瘀互结证与血瘀证证候差异的生物学内涵 |
| 3.4 展望 |
| 参考文献 |
| 论文总结 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1基因甲基化检测联合粪便潜血定量试验在结直肠癌中的诊断价值（论文提纲范文）
| 1 对象与方法 |
| 1.1 对象 |
| 1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.3 甲基化检测 |
| 1.3.1 Cp G岛预测 |
| 1.3.2 IGFBP-r P1甲基化状态检测 |
| 1.4 粪便潜血定量试验 |
| 1.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 IGFBP-r P1甲基化状态 |
| 2.2 2组患者粪便潜血定量试验结果 |
| 2.3 结直肠癌影响因素的二元Logistic回归分析 |
| 2.4 IGFBP-r P1基因甲基化状态和粪便潜血定量水平对结直肠癌的预测价值 |
| 3 讨论 |
（4）能量负平衡奶牛产后乏情的关键蛋白筛选及作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 文献综述 |
| 1.1 奶牛能量负平衡与繁殖的关系 |
| 1.1.1 奶牛能量负平衡的概述 |
| 1.1.2 能量负平衡对奶牛发情周期和繁殖的影响 |
| 1.2 奶牛卵泡生长发育的研究进展 |
| 1.2.1 卵泡发育的生理过程 |
| 1.2.2 奶牛产后腔前卵泡发育 |
| 1.2.3 排卵前卵泡的发育 |
| 1.3 能量负平衡对奶牛卵泡发育的影响 |
| 1.3.1 卵泡液中能量代谢对卵泡发育的影响 |
| 1.3.2 卵泡内细胞对葡萄糖的摄取 |
| 1.3.3 卵泡内细胞对脂肪酸的摄取 |
| 1.3.4 葡萄糖和脂肪酸代谢之间的稳态对卵泡内细胞的影响 |
| 1.3.5 能量负平衡对奶牛产后发情的影响 |
| 1.4 奶牛蛋白质组学的研究进展 |
| 1.4.1 蛋白组学技术在奶牛临床上的作用 |
| 1.4.2 奶牛血液蛋白质组学 |
| 1.4.3 奶牛组织蛋白质组学 |
| 1.5 奶牛脂联素的研究进展 |
| 1.5.1 脂联素与能量代谢的关系 |
| 1.5.2 脂联素与生殖机能的关系 |
| 1.5.3 脂联素在奶牛繁殖中的作用 |
| 1.6 PI3K-AKT信号通路与奶牛卵泡生长发育的关系 |
| 1.6.1 PI3K-AKT信号通路 |
| 1.6.2 PI3K-AKT信号通路在卵泡发育中的作用 |
| 1.7 研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 主要试验仪器 |
| 2.1.3 实验耗材和试剂 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 试验动物分组 |
| 2.2.2 试验样品采集 |
| 2.2.3 样品处理 |
| 2.2.4 生化指标的检测 |
| 2.2.5 Western blot 检测方法 |
| 2.2.6 免疫组化检测方法 |
| 2.2.7 ELISA 检测方法 |
| 2.2.8 统计学分析方法 |
| 2.2.9 血清、卵泡液和卵巢皮质组织的蛋白组学分析 |
| 2.2.10 差异表达蛋白 ADPN 与 NEB 奶牛乏情的关系及其风险预警作用 |
| 2.2.11 ADPN 对低糖环境下奶牛体外 GCs 增殖和类固醇激素合成的影响 |
| 2.2.12 ADPN 经 PI3K-AKT 信号通路对低糖环境下 GCs 增殖和类固醇激素合成的影响 |
| 3 结果 |
| 3.1 两组试验奶牛临床病理学变化 |
| 3.1.1 试验奶牛临床信息的比较 |
| 3.1.2 试验奶牛血液生化指标水平的比较 |
| 3.2 两组试验奶牛蛋白组学分析结果的比较 |
| 3.2.1 试验奶牛血清、卵泡液和卵泡腔组织匀浆液中蛋白浓度 |
| 3.2.2 蛋白质鉴定结果和质谱总体分析 |
| 3.2.3 血清差异蛋白及其生物信息学分析结果 |
| 3.2.4 卵泡液差异蛋白及其生物信息学分析结果 |
| 3.2.5 卵巢组织差异蛋白及其生物信息学分析结果 |
| 3.3 两组试验奶牛DEP的免疫印迹验证结果 |
| 3.3.1 血清中DEP疫印迹验证 |
| 3.3.2 卵泡液中DEP疫印迹验证 |
| 3.3.3 卵巢皮质组织差异蛋白免疫印迹验证 |
| 3.4 能量负平衡所致的乏情奶牛DEP的韦恩分析结果 |
| 3.5 ADPN与NEB奶牛乏情的关系及其风险预警作用 |
| 3.5.1 试验牛产后生化指标的水平 |
| 3.5.2 试验奶牛产后血液和卵泡液生化指标相关性分析 |
| 3.5.3 试验奶牛卵巢组织中ADPN及其受体的基因表达水平 |
| 3.5.4 试验奶牛组织中ADPN及其受体的蛋白表达水平 |
| 3.5.5 奶牛产后NEB与血清ADPN的关系 |
| 3.5.6 奶牛产后14-21d血清ADPN对产后55-60d卵泡发育的风险预警作用 |
| 3.6 ADPN对低糖环境下奶牛颗粒细胞增殖和激素分泌的影响 |
| 3.6.1 奶牛体外培养的颗粒细胞(GCs)模型的鉴定 |
| 3.6.2 低糖培养对GCs类固醇激素分泌的影响 |
| 3.6.3 低糖培养对GCs增殖的影响 |
| 3.6.4 低糖培养GCs对ADPN受体的影响 |
| 3.6.5 低糖培养模型中ADPN最佳添加剂量和时间 |
| 3.6.6 低糖培养模型下不同浓度ADPN对GCs激素分泌的影响 |
| 3.6.7 低糖培养模型中添加不同浓度ADPN对GCs增殖的影响 |
| 3.7 ADPN经PI3K-AKT信号通路对低糖环境下GCs增殖和激素分泌的影响 |
| 3.7.1 ADPN对低糖培养GCs模型中AKT磷酸化的影响 |
| 3.7.2 ADPN 经 PI3K/AKT 通路对低糖培养 GCs 模型细胞活性的影响 |
| 3.7.3 ADPN 通过 PI3K-AKT-CDK2 对低糖培养 GCs 模型 CDK2 的影响 |
| 3.7.4 ADPN 经 PI3K/AKT 对低糖培养 GCs 模型类固醇激素合成的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 能量负平衡奶牛产后乏情蛋白组学分析及其差异蛋白的潜在作用 |
| 4.2 ADPN与NEB奶牛卵泡发育的关系及其风险预警作用 |
| 4.3 ADPN对低糖环境下奶牛颗粒细胞增殖和类固醇激素合成的影响 |
| 4.4 ADPN 经 PI3K-AKT 对低糖环境下 GCs 增殖和类固醇激素合成的影响 |
| 5 结论 |
| 6 附表 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（5）FGF19改善高脂诱导的肥胖对骨骼肌损害的作用与机制研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 FGF19改善高脂诱导的肥胖所致的肌肉萎缩 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 FGF19改善高脂诱导的肥胖所致的脂糖代谢紊乱 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三部分 FGF19改善高脂诱导的肥胖所致的irisin表达降低 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第四部分 FGF19通过AMPK/SIRT-1/PGC-1α通路改善高脂诱导的肥胖对骨骼肌的损害 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 肌分泌因子是否可作为肌少性肥胖潜在的诊断指标以及治疗靶点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的主要学术论文 |
（6）H3R117单ADP核糖基化调节IGFBP1甲基化影响大肠癌脂代谢机制研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 结直肠癌细胞核单ADP核糖基化水平的分析 |
| 1.实验对象 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 H3R117单ADP核糖基化经IGFBP1对LoVo细胞脂代谢及凋亡的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 H3R117单ADP核糖基化经IGFBP1 影响LoVo细胞脂代谢及凋亡的机制研究 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 文献综述 PADs介导的瓜氨酸化与肿瘤相关的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士研究生期间发表文章 |
（7）IGFBP-3和GalNAc-T14对脑胶质瘤细胞增殖和周期的影响及其信号机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 胰岛素样生长因子系统与肿瘤的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）Lnc00839通过miR-19-3p/IGF-1分子轴对阴道壁成纤维细胞COL-1分泌影响及其分子机制探究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:Lnc00839 激活IGF-1 促进成纤维细胞COL-1 分泌 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试剂与仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要试剂的配置 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 qRT-PCR检测m RNA表达水平 |
| 2.2.2 Western-blot |
| 2.2.3 细胞荧光原位杂交实验 |
| 2.2.4 细胞原代培养及纯化 |
| 2.2.5 细胞传代培养、冻存及复苏 |
| 2.2.7 ELISA |
| 2.2.8 细胞转染 |
| 2.3 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 Lnc00839在POP患者中的表达降低 |
| 3.1.1 PCR检测两组间Lnc00839 表达差异 |
| 3.1.2 荧光原位杂交检测两组间表达差异 |
| 3.2 Lnc00839 降低与POP-Q评分相关性分析 |
| 3.3 在POP患者阴道壁组织中,IGF-1 及其受体中表达降低,COL-1 型胶原分泌减少,二者呈正相关 |
| 3.4 POP患者自噬与凋亡水平升高 |
| 3.4.1 TUNEL检测POP患者中凋亡水平增加 |
| 3.4.2 Western-blot检测自噬标记物 |
| 3.4.3 Western-blot检测凋亡标记物 |
| 3.5 IGF-1 可促进成纤维细胞的COL-1 分泌。IGF-1 可抑制自噬标记物表达水平 |
| 3.6 Lnc00839 可上调IGF-1 的表达 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分:Lnc00839 通过mi R-19-3p调控IGF-1 促进成纤维细胞COL-1 型胶原分泌 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要试剂的配置 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 生物信息学预测 |
| 2.2.2 细胞复苏 |
| 2.2.3 组织RNA提取及PCR检测 |
| 2.2.4 细胞RNA提取及PCR |
| 2.2.5 细胞荧光原位杂交实验 |
| 2.2.6 细胞转染 |
| 2.2.7 双荧光素酶实验 |
| 2.2.8 Western-blot |
| 2.2.9 流式检测凋亡 |
| 2.3 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 生物信息学预测LncRNA及靶向miRNA |
| 3.2 miR-19-3p在脱垂组织中的表达 |
| 3.2.1 PCR检测两组间miR-19-3p的表达差异 |
| 3.2.2 荧光原位杂交检测两组间mi R-19-3p的表达情况 |
| 3.3 Lnc00839与miR-19-3p的相互作用 |
| 3.3.1 Lnc00839 抑制mi R-19-3p表达 |
| 3.3.2 双荧光素酶实验验证Lnc00839与miR-19-3p的靶向关系 |
| 3.3.3 Lnc00839 通过miR-19-3p上调成纤维细胞IGF-1 表达促进COL-1 分泌 |
| 3.4 miR-19-3p靶向作用于IGF-1 |
| 3.4.1 PCR鉴定转染效果 |
| 3.4.2 miR-19-3p对成纤维细胞IGF-1 表达的影响 |
| 3.4.3 双荧光素酶实验验证miR-19-3p与 IGF-1 的靶向关系 |
| 3.5 miR-19-3p激活POP患者成纤维细胞自噬水平,促进细胞凋亡 |
| 3.5.1 PCR鉴定转染效果 |
| 3.5.2 miR-19-3p对成纤维细胞自噬水平的影响 |
| 3.5.3 miR-19-3p对成纤维细胞凋亡水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分:Lnc00839 通过miR-19-3p/IGF-1 分子轴调控AKT-mTOR-p70s6k通路促进阴道壁成纤维细胞COL-1 分泌 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要试剂的配置 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 western-blot |
| 2.2.2 ELISA |
| 2.2.3 细胞转染 |
| 2.2.4 RT-PCR |
| 2.3 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 脱垂组及对照组中AKT-mTOR-p70s6k通路蛋白表达情况 |
| 3.2 IGF-1 通过AKT-mTOR-p70s6k通路调控COL-1 的分泌 |
| 3.3 Lnc00839 通过miR-19-3p/IGF-1 分子轴激活AKT-mTOR-p70S6K通路 |
| 3.4 Lnc00839 激活AKT-mTOR-p70S6K通路抑制自噬促进阴道壁成纤维细胞COL-1 分泌 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 胰岛素样生长因子(IGF-1)在盆底功能障碍相关疾病中的作用及机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）脂肪因子WISP1对妊娠期糖尿病胰岛素信号通路的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:WISP1 在妊娠期糖尿病患者血清、皮下脂肪及胎盘组织中表达的研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 研究对象和分组 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 临床样本收集 |
| 2.3.2 生化指标检测 |
| 2.3.3 相关指数计算 |
| 2.3.4 实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法检测 SAT 和胎盘组织 WISP1 mRNA的表达水平 |
| 2.3.5 Western Blot方法测定SAT和胎盘组织WISP1 蛋白水平 |
| 2.3.6 免疫组化 |
| 2.4 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 患者临床及生化指标的比较 |
| 3.2 两组之间的血清WISP1 水平 |
| 3.3 血清WISP1 水平和临床及生化指标之间的相关性 |
| 3.4 两组之间WISP1 mRNA表达水平的比较 |
| 3.5 WISP1 蛋白水平的表达 |
| 3.6 免疫组织化学检测WISP1 蛋白在组织中定位 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分:WISP1对3T3L1 脂肪细胞的作用机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要试剂的配制 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 过表达慢病毒载体构建 |
| 2.2.2 干扰慢病毒载体构建 |
| 2.2.3 细胞慢病毒感染 |
| 2.2.4 分组 |
| 2.2.5 实时定量PCR检测3T-3L1 脂肪细胞WISP1mRNA的表达 |
| 2.2.6 细胞培养 |
| 2.2.7 油红O染色 |
| 2.2.8 葡萄糖消耗实验 |
| 2.2.9 MTT法观察3T3-L1 前脂肪细胞的增殖 |
| 2.2.10 用LPS处理WISP1过表达和基因沉默的脂肪细胞 |
| 2.2.11 流式细胞仪检测LPS处理后各组脂肪细胞的凋亡 |
| 2.2.12 qRT-PCR方法检测上述各组细胞中WISP1、IL-6、TNF-α、Akt、β-actin、Fox O3a和 PI3K m RNA表达水平 |
| 2.2.13 Western-blot检测上述各组细胞中Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K、凋亡相关蛋白和Fox O3a核转位的蛋白表达水平 |
| 2.2.14 ELISA试剂盒检测各组细胞中炎症因子IL-6和TNF-α的含量 |
| 2.2.15 向各组脂肪细胞分别加入PI3k抑制剂观察对胰岛素信号通路的影响 |
| 2.3 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 过表达慢病毒载体质粒及RNAi慢病毒质粒测序鉴定 |
| 3.2 各组脂肪细胞WISP1 表达验证结果 |
| 3.3 油红O染色结果 |
| 3.4 葡萄糖消耗实验结果 |
| 3.5 MTT结果 |
| 3.6 流式细胞仪分析各组脂肪细胞的凋亡结果 |
| 3.7 各组细胞中炎症因子IL-6和TNF-α的比较 |
| 3.8 各组脂肪细胞中凋亡相关蛋白的比较 |
| 3.9 荧光定量PCR测定加入LPS后各组PI3K、Akt和 Fox O3a的表达 |
| 3.9.1 各组脂肪细胞PI3K表达的比较 |
| 3.9.2 各组脂肪细胞Akt表达的比较 |
| 3.9.3 各组脂肪细胞Fox O3a表达的比较 |
| 3.10 Western-blot检测各组细胞中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt和Fox O3a核转位的蛋白表达水平 |
| 3.10.1 各组脂肪细胞p-PI3K/PI3K的比较 |
| 3.10.2 各组脂肪细胞p-Akt/Akt和 Fox O3a核转位的蛋白水平的比较 |
| 3.11 加入PI3k抑制剂阻断PI3k/Akt信号通路后可以逆转WISP1 对脂肪细胞的保护作用 |
| 3.11.1 各组脂肪细胞p-PI3K/PI3K的比较 |
| 3.11.2 流式细胞仪分析各组脂肪细胞的凋亡结果 |
| 3.11.3 各组脂肪细胞中凋亡相关蛋白的比较 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 综述 WISP1 与代谢性疾病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）质谱技术在多囊卵巢综合征子宫内膜生物标记物研究中的应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 一 研究背景 |
| 二 研究进展 |
| 三 研究流程 |
| 第二章: PCOS患者子宫内膜蛋白质组学的研究 |
| 一 研究背景 |
| 二 材料与方法 |
| 三 实验结果 |
| 四 讨论 |
| 五 章节小结 |
| 第三章: MALDI-MSI技术在PCOS患者子宫内膜小分子代谢物研究中的应用 |
| 一 研究背景 |
| 二 材料与方法 |
| 三 实验结果 |
| 四 讨论 |
| 五 章节小结 |
| 第四章: 讨论与总结 |
| 参考文献 |
| 多囊卵巢综合征子宫内膜病变研究(综述) |
| 参考文献 |
| 附录1: 中英文略缩词对照表 |
| 附录2: 差异表达的蛋白列表 |
| 致谢 |
四、胰岛素样生长因子-Ⅰ和胰岛素样生长因子结合蛋白-1与妊高征的关系（论文参考文献）
- [1]胎盘IGF-Ⅱ、IGFBP-1表达与妊高征围生儿不良结局的关系[J]. 郭少峰,贾君芳,王瑞萍. 中国优生与遗传杂志, 2021(09)
- [2]稳定性冠心病痰瘀互结证与血瘀证的DIA定量蛋白质组学研究[D]. 杨光. 中国中医科学院, 2021(02)
- [3]胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1基因甲基化检测联合粪便潜血定量试验在结直肠癌中的诊断价值[J]. 高文仓,张月蒙. 中国医药, 2021(06)
- [4]能量负平衡奶牛产后乏情的关键蛋白筛选及作用机制研究[D]. 赵畅. 黑龙江八一农垦大学, 2021(01)
- [5]FGF19改善高脂诱导的肥胖对骨骼肌损害的作用与机制研究[D]. 郭艾. 重庆医科大学, 2021(01)
- [6]H3R117单ADP核糖基化调节IGFBP1甲基化影响大肠癌脂代谢机制研究[D]. 王传玲. 重庆医科大学, 2021(01)
- [7]IGFBP-3和GalNAc-T14对脑胶质瘤细胞增殖和周期的影响及其信号机制研究[D]. 杨娇. 河北医科大学, 2021(02)
- [8]Lnc00839通过miR-19-3p/IGF-1分子轴对阴道壁成纤维细胞COL-1分泌影响及其分子机制探究[D]. 尹一童. 中国医科大学, 2021(02)
- [9]脂肪因子WISP1对妊娠期糖尿病胰岛素信号通路的作用机制研究[D]. 刘立朝. 中国医科大学, 2021(02)
- [10]质谱技术在多囊卵巢综合征子宫内膜生物标记物研究中的应用[D]. 朱宇. 北京协和医学院, 2020(05)