一、左肾静脉不全结扎对大鼠肾水通道蛋白1和水通道蛋白2 mRNA表达的影响（论文文献综述）
边红萍[1]（2021）在《基于“肾主水”理论探讨金匮肾气丸治疗慢性肾功能衰竭的实验研究》文中研究说明研究目的本研究工作以2.5%腺嘌呤混悬液灌胃与单侧输尿管结扎两种方法复制CRF大鼠模型,以金匮肾气丸“补益肾气”为治法,研究肺、肾、膀胱上APQ1-4的表达,探讨机体水液代谢的调控与机理,评价中医“肾主水”理论的科学性,为金匮肾气丸在中医慢性肾脏病的治疗与干预水液代谢调控提供实验依据。研究方法1金匮肾气丸治疗腺嘌呤慢性肾功能衰竭大鼠实验研究将60只健康雄性SD大鼠,随机分正常组（n=20只）和腺嘌呤造模组（n=40只）,适应性喂养1周后,用2.5%的腺嘌呤悬浊液剂量为250mg/（kg·d）灌胃复制CRF模型4周,两组中各取10只大鼠进行血、尿肾组织病理检测,评估腺嘌呤CRF大鼠模型。剩余40只大鼠分为正常组、CRF模型组、金匮肾气丸中剂量、金匮肾气丸高剂量4组,每组10只。金匮肾气丸中、高剂量组分别给予对应浓度剂量金匮肾气丸溶液灌胃,正常组、CRF模型组大鼠予以等量蒸馏水灌胃,治疗4周,比较各组大鼠24h-UTP,血常规、血生化与肾脏病理指标。2金匮肾气丸治疗UUO慢性肾功能衰竭大鼠实验研究50只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组（n=10只）和UUO造模组（n=40只）。采用UUO手术法复制CRF模型,将大鼠10%水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉,在左肾下极临近肾门处及输尿管的上1/3处用0#丝线结扎并剪断,缝合肌肉皮肤组织。假手术组大鼠给予等量10%水合氯醛腹腔麻醉开腹,仅钝性分离左侧输尿管并不予以结扎;正常组不做任何手术处理。UUO术后2周随机抽取10只大鼠评估UUO法CRF大鼠模型。剩余40只大鼠再分为假手术组、UUO模型组、金匮肾气丸中剂量组、金匮肾气丸高剂量组,每组10只。假手术组、UUO模型组采用蒸馏水灌胃;金匮肾气丸中、高剂量治疗组分别给予对应浓度剂量的金匮肾气溶液灌胃,疗程4周,比较各组大鼠的24h-UTP,血常规与生化、肾脏病理指标。（正常组同实验第一部分）3.慢性肾功能衰竭大鼠水通道蛋白表达的实验研究金匮肾气丸治疗4周,腺嘌呤灌胃与UUO法CRF各组大鼠获取肾脏、肺脏、膀胱组织,用Western blotting检测对应的水通道蛋白AQP1、AQP2、AQP3、AQP4,将不同蛋白条带图像用Image J软件进行灰度值分析,对应DAPDH蛋白条带作进行数据矫正。4.采用SPSS18.0软件对实验结果进行分析,计量资料用均数±标准差（x±s）表示,多组间均数的比较采用两独立样本t检验和单因素方差分析,双侧检验,检验水准α=0.05,P<0.05定义为统计差异性显着。研究结果1.腺嘌呤造模组4周大鼠24h U-TP、BUN、Scr与正常组比较均增高,统计有显着性差异（P<0.05）,大鼠肾脏病理损伤与CRF病理表现一致。金匮肾气丸治疗各组与腺嘌呤模型组24h U-TP、BUN、Scr水平比较降低,有显着统计学差异（P<0.05）,金匮肾气治疗组各组大鼠肾脏病理损伤与腺嘌呤模型组相比,有不同程度减轻。2.UUO术后2周大鼠24h U-TP、BUN、Scr水平与正常组比较均升高,统计有显着性差异（P<0.05）,UUO大鼠肾脏病理损伤与CRF病理表现一致。金匮肾气丸各治疗组与UUO模型组24h U-TP、BUN、Scr水平比较降低,有显着统计学差异（P<0.05）。金匮肾气治疗组各组大鼠肾脏病理损伤与UUO模型组相比,有不同程度减轻。3.各组大鼠肾脏、肺脏、膀胱AQP蛋白检测中（1）腺嘌呤模型组大鼠肾脏AQP1-4与膀胱AQP3表达上调,与正常组比较有显着性差异（P<0.05）。肺脏AQP1与膀胱AQP1表达下调,与正常组比较有显着性差异（P<0.05）。（2）UUO模型组大鼠肾脏AQP1与AQP4、肺脏AQP1、膀胱AQP4表达下调,与正常组比较统计有显着性差异（P<0.05）;膀胱AQP3表达上调,与正常组比较统计有显着性差异（P<0.05）。（3）腺嘌呤CRF金匮肾气丸中高剂量治疗组肾脏AQP1-4均有下调,与腺嘌呤模型组比较统计有差异显着性（P<0.05）。膀胱AQP1水平上调,与腺嘌呤模型组比较统计有差异显着性（P<0.05）。（4）UUO金匮肾气丸高剂量治疗组膀胱AQP4蛋白明显上调,与UUO模型组比较有显着性差异（P<0.05）。研究结论1、金匮肾气丸可以改善腺嘌呤与UUO慢性肾功能衰竭大鼠的生存质量,改善肾功能,减少24h尿蛋白定量,减轻大鼠肾脏的病理损害,可不同程度改善肾脏纤维化损伤程度。2、金匮肾气丸治疗UUO与腺嘌呤CRF大鼠,通过调节不同种类与部位AQP表达发挥作用。两者侧重有不同,金匮肾气丸治疗腺嘌呤CRF主要下调肾脏AQP1-4和上调膀胱AQP1表达。金匮肾气丸治疗UUO大鼠,其肾脏与肺脏AQP2、AQP3、AQP4表达上调不显着,而以膀胱AQP4蛋白表达上调突出。
朱晓冉[2]（2020）在《糖皮质激素通过抑制精氨酸加压素通路逆转急性水负荷心衰大鼠稀释性低钠血症》文中提出心力衰竭（heart failure）简称心衰（HF）,是指由于心脏的收缩功能和/或舒张功能发生障碍,静脉回心血量不能充分泵出心脏,导致心室充盈压力增高,静脉系统血液淤积,动脉系统相对充盈不足,组织灌注不足,从而引起心脏循环功能障碍的综合征。心衰并不是一个独立的疾病,而是心脏疾病发展的终末阶段。尽管我们使用多种药物和非药物的方式治疗心衰,心衰患者的5年生存率仍然仅有50%。随着人口老龄化,心衰患者也日益增加,心衰的治疗已经成为世界关注的重要公共卫生问题之一。心力衰竭的临床特征是水钠潴留,在晚期失代偿心衰患者中表现的尤为突出。心脏及肾脏之间有多重共同作用的通路,相互影响,互为因果。心力衰竭的主要病理生理机制是血管收缩/钠潴留系统（肾素-血管紧张素-醛固酮系统、交感神经系统、精氨酸加压素系统）和/或血管舒张/钠排泄（钠尿肽系统）系统调节失衡导致液体潴留和电解质平衡紊乱。尽管利尿剂,β受体阻滞剂,血管紧张转换酶抑制剂（ACEI）,血管紧张素受体阻断剂（ARB）和利钠肽类药物的应用可以显着改善心衰患者的症状,延长生存时间,但是对于晚期失代偿心衰伴利尿剂抵抗和/或稀释性低钠血症的患者,仍需要探索更加安全、便捷和有效的治疗措施来解决机体水钠潴留的状态,提高患者的生存率。本课题组在以往的临床实践中发现,在心衰伴水钠潴留的患者给予糖皮质激素补充治疗,可以改善肾功能,增加肾小球滤过率,产生强大的促利尿作用,提高生存率。但是其药理学机制并不明确。我们通过临床和动物实验均证实了糖皮质激素可以抑制RAAS系统,降低血管紧张Ⅱ和醛固酮的浓度,产生强大的利尿作用。同时,我们还通过动物实验证实了糖皮质激素可以上调肾脏钠尿肽A型受体（natriuretic peptide receptor A,NPR-A）的表达,激活钠尿肽系统,从而增加肾脏血流量,改善肾功能,产生强大的利尿作用。早期研究发现,心衰患者由于神经内分泌系统激活,激素精氨酸加压素（arginine vasopressin,AVP）水平非渗透性升高而出现异常的水钠潴留、低渗透压和稀释性低钠血症。心衰时持续性AVP非渗透性释放通过肾脏精氨酸加压素2型受体（V2R）的激活调控下游的水通道蛋白和钠通道蛋白,导致水钠潴留和低钠血症,这是导致死亡和住院的危险因素。血浆AVP水平与慢性心衰患者的心衰严重程度和/或生存率密切相关。由于低钠血症的临床不良后果,V2R拮抗剂被开发用于治疗心衰患者的低钠血症。同时,人们观察到皮质醇功能减退的患者会出现低钠血症,在给予糖皮质激素补充治疗后症状得到纠正。这些前期研究都使我们猜测糖皮质激素是否也可能通过抑制V2R起到增加水钠排泄的作用呢?为了研究糖皮质激素对精氨酸加压素系统的影响,我们通过左冠状动脉结扎术造成大鼠心梗后心力衰竭模型,饲养8周后给予急性水负荷形成慢性心衰伴稀释性低钠血症模型,评估糖皮质激素对心衰大鼠稀释性低钠血症和左心室功能的改善作用,并进一步探讨糖皮质激素促水钠排泄作用的分子学机制。肌酐清除率（Creatinine clearance,Scr）作为评估肾小球滤过率（glomerular filtration rate,GFR）的标志性指标之一,容易受到饮食、生理或病理因素的影响。所以不能作为衡量GFR的金标准。胱抑素C在人体大多数细胞组织中稳定的表达,以恒定的速率产生,完全被肾小球滤过并在近端小管被重吸收和降解。由于其一般不容易受到饮食、性别、年龄、药物等外界因素的影响,因此对于GFR的评估优于Scr及其他内源性标志物。然而,以往的研究报道,皮质类固醇激素等非肾因素可以增加血清胱抑素C水平,但不影响肾功能,其机制尚不清楚。因此,我们给予正常大鼠糖皮质激素,采用金标准法（菊粉清除率法）测定GFR以及循环和组织中的胱抑素C水平,探讨糖皮质激素对胱抑素C的影响及其机制。第一部分糖皮质激素改善心衰大鼠水钠排泄和左心功能目的:心衰患者大多同时伴有肾功能不全,而肾功能不全又导致心衰症状进一步加重,二者之间形成一个恶性循环,从而加重患者心肾损伤,导致病情恶化。我们以往的临床研究表明,糖皮质激素可以改善慢性失代偿心衰患者临床症状和肾功能,产生强大的利尿作用。本研究采用动物模型,旨在明确糖皮质激素对慢性心衰伴稀释性低钠血症大鼠心肾功能的改善作用。方法:1.利用左冠状动脉前降支结扎法造成大鼠心肌梗死模型,8周后形成慢性心衰。腹腔注射6%体重的去离子水,形成慢性心衰伴稀释性低钠血症大鼠模型。2.把实验动物随机分成4组:假手术组（CON组）,慢性心衰组（CHF组）,糖皮质激素治疗组（DEX组）,糖皮质激素及糖皮质激素受体（GR）抑制剂联合治疗组（RU486+DEX组）。3.通过测定尿量、尿钠、尿渗透压、血钠和血渗透压等指标评估糖皮质激素对心衰大鼠水钠潴留的改善作用。4.评估糖皮质激素对心衰大鼠肾功能的影响。5.评估糖皮质激素是否对大鼠心脏纤维化有改善作用。6.采用Millar压力-容积导管评估心衰大鼠左心功能。结果:1.生理指标在急性水负荷试验中,与假手术组相比,心衰大鼠肾脏水钠排泄能力显着受损。CHF组大鼠在慢性心衰和急性水负荷的共同作用下表现为:尿量减少,血钠浓度升高,血渗透压降低,尿钠排泄量减少,尿渗透压升高。值得注意的是,在给予地塞米松预处理后6小时内,大鼠就明显表现出尿量的增加（P<0.01）。在药物预处理第6小时我们给予6%体重水负荷,随后地塞米松预处理的心衰大鼠依然可以排出额外的自由水摄入（P<0.01）。由于地塞米松引起排水增加,使心衰大鼠的血钠,血氯恢复至正常水平,成功逆转了心衰大鼠的稀释性低钠血症。此外,DEX预处理可逆转心衰大鼠急性水负荷诱导的血浆渗透压下降。DEX导致尿量增多的同时,伴随着尿钠的增多。DEX预处理的有益作用均可被糖皮质激素受体（GR）拮抗剂RU486所抵消,说明这些作用是GR介导的。2.糖皮质激素对肾功能的影响我们研究了糖皮质激素对心衰大鼠肾功能的影响,与正常对照组相比,心衰大鼠的肌酐清除率显着降低（P<0.01）,血清肌酐升高（P<0.05）,地塞米松可以增加肌酐清除率,降低血清肌酐（P<0.01）。但是四组间尿蛋白/肌酐并没有统计学差异（P>0.05）。这种有益的作用可被糖皮质激素受体（GR）拮抗剂RU486阻断,提示这些作用是GR介导的。3.糖皮质激素对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响我们通过Western blot和马松染色法研究地塞米松对心脏胶原蛋白的影响。我们发现,地塞米松抑制胶原蛋白Ⅰ的表达,但并不影响胶原蛋白的表达Ⅲ。马松染色同样证实地塞米松对心脏有抑制胶原蛋白合成增加的作用。4.血流动力学指标我们通过Millar压力-容积导管研究了DEX对心衰大鼠左心功能的影响。主要研究了收缩末期压力-容积关系（end-systolic pressure-volume relationship,ESPVR）、左心室压力上升最大速率（maximal slope of systolic pressure increment occurs early during isovolumic contraction,+d P/dtmax）、前负荷补充功（preload recruitable stroke work,PRSW）、等容松弛常数（iso-volumic relaxation constant,Tau）、左心室舒张末期压力（left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP）五个常见指标。收缩期末压力-容积关系（ESPVR）描述了心室在不同的左室充盈容积下所能产生的最大压力。ESPVR被认为是最可靠的心室收缩力指标。在实验中,我们通过阻断大鼠下腔静脉改变前负荷,绘制出不同负荷下心室收缩终点的压力和相应的容积值,从而得到一条具有一定斜率的直线。心力衰竭时,ESPVR变平并向右移位,表示心肌收缩力下降。由于ESPVR不受前负荷、后负荷和心率变化的影响,因此与其他血流动力学参数如射血分数、心输出量、+d P/dtmax和卒中体积相比,它是一个更好的收缩功能指标。每搏功即心肌收缩力,不仅随后负荷变化,也随前负荷变化。因此,通常采用每搏功与舒张末期容积的线性关系作为衡量心脏收缩力的指标,称为前负荷补充功（PRSW）,其对前后负荷的变化非常不敏感。心力衰竭时,心肌收缩力减弱,PRSW的斜率变小。收缩压增量的最大斜率（+d P/dtmax）出现在等容收缩的早期,是与心脏收缩力相关的参数之一。然而,+d P/dtmax受前负荷、后负荷、心率和心肌肥厚的影响,收缩力指数较差。松弛常数（Τau）表示心室压力在等容舒张期的指数衰减。多项研究表明Tau对心脏前后负荷不敏感。心力衰竭时,左室舒张压和右房压升高,Τau延长。左室舒张末期压（LVEDP）,即心脏的前负荷,是心脏收缩前心肌纤维的负荷,即舒张末期流向心室的血流量。LVEDP是心力衰竭最重要的标志。心衰时LVEDP升高,当心衰加重或失代偿时,同样可导致LVEDP升高。LVEDP的增加意味着体积超载或液体潴留。前负荷越大,下一次心脏收缩的压力越大。数据显示,与正常对照组相比,CHF组大鼠的ESPVR（环中的红线所示）降低（P<0.01）,地塞米松增加了CHF大鼠的ESPVR（图2A和B）（P<0.01）,心衰大鼠的Tau较正常对照组明显增加（P<0.05）,地塞米松预处理可以降低心衰大鼠的松弛常数（P<0.05）（图2 E）,心衰大鼠的LVEDP较正常大鼠明显升高（P<0.05）,地塞米松可降低心衰大鼠的LVEDP（P<0.01）（图2 F）。四组间+d P/dtmax和PRSW无差异（图2C和D）（P>0.05）。这些参数的变化说明心衰大鼠的心肌收缩力降低,地塞米松在增加尿量的同时显着改善了心脏的收缩功能和舒张功能。地塞米松预处理的有益作用均可被GR拮抗剂RU486所抵消,提示这些作用是由糖皮质激素受体介导的。第二部分糖皮质激素对心衰时精氨酸加压素通路的作用及分子生物学机制目的:失代偿心衰伴低钠血症时,心排血量减低、相对有效循环血容量不足不但激活了交感神经系统、RAAS系统,也导致AVP释放明显增加,AVP V2受体（V2R）表达增加,从而激活下游的腺苷酸环化酶,促进集合管水通道蛋白（AQP）的表达增加,机体排水能力下降,最终导致水潴留和稀释性低钠血症。我们的研究目的是通过动物实验,观察糖皮质激素是否可以通过抑制V2R-AQP途径,增加肾脏对自由水的排泄能力。方法:用定量Western Blot技术检测肾脏内髓V2受体的表达,免疫组织化学技术确定V2受体的表达部位。用定量Western Blot技术检测肾脏内髓水通道蛋白2（AQP2）和水通道蛋白3（AQP3）的表达,免疫组织化学技术确定水通道蛋白的表达部位。结果:1.糖皮质激素对心衰大鼠血浆AVP的作用既往的研究发现CHF伴低钠血症的患者血浆AVP浓度升高。为了进一步研究糖皮质激素对血浆AVP水平的影响,我们通过ELISA实验检测了各组大鼠血浆AVP水平。我们并没有发现CHF组大鼠与假手术组大鼠血浆AVP水平存在明显的统计学差异（P>0.05）,这可能与心衰大鼠水负荷后血浆渗透压明显下降,暂时下调了AVP水平有关。地塞米松治疗明显下调了心衰大鼠血浆的AVP水平（P<0.05）。2.糖皮质激素下调心衰大鼠V2R的表达肾脏对水的重新收主要是通过表达在集合管基底膜外侧的V2R调控。在对心衰大鼠的研究中发现血清AVP浓度升高导致了下游AQP2的上调是导致心衰水潴留的主要原因。为了研究糖皮质激素对心衰大鼠肾脏V2R的影响,我们通过Western blot检测了V2R在肾脏内髓中的表达。结果表明,CHF大鼠V2R表达高于正常对照组（P<0.05）。然而,DEX治疗降低了CHF大鼠集合管的V2R表达（P<0.05）。DEX对V2R的抑制作用可以被GR拮抗剂RU486阻断（P<0.05）（图2A）。提示这种抑制作用是通过糖皮质激素受体介导的。免疫组化结果显示V2R定位于集合管基底膜侧,进一步验证了WB的结果。3.糖皮质激素下调心衰大鼠肾脏内髓质组织AQP2的表达V2R的激活可以调控AQP2向顶端膜穿梭,从而导致肾脏对自由水的渗透性增加。为了确定糖皮质激素对AQP2的影响,我们用western blot和免疫组化方法检测了AQP2蛋白的表达量和表达部位。AQP2表达在肾脏内髓集合管顶端膜,免疫印迹在25KD处有一条蛋白带,在35-45KD处有一条糖基化蛋白带。我们发现与假手术组相比,心衰大鼠的肾脏内髓集合管中的AQP2显着增加（P<0.05）,而DEX预处理可以明显降低了AQP2的表达（P<0.05）。糖基化的AQP2表达了同样的趋势。我们通过免疫组化明确了AQP2的组织学定位,证实了WB的结果。4.糖皮质激素下调心衰大鼠肾脏内髓质组织AQP3的表达V2R的激活可以调控AQP3向基底外侧膜穿梭,把主细胞的水重吸收入血液。和AQP2的实验方法相同,为了确定糖皮质激素对AQP3的影响,我们用western blot和免疫组化方法检测了它们的表达。AQP3表达在肾脏内髓集合管基底膜,免疫印迹在32KD处有一条蛋白带,在40-55KD处有一条糖基化蛋白带。我们发现AQP3在心衰大鼠内髓集合管的表达也较假手术组大鼠显着升高（P<0.05）,DEX明显下调AQP3的表达（P<0.01）糖基化的AQP3表达了同样的趋势。我们通过免疫组化明确了AQP3的组织学定位,确认WB的结果。第三部分糖皮质激素通过精氨酸加压素通路逆转心衰大鼠体内钠排泄目的:心衰时,V2R也可以激活钠通道,使肾脏内髓钠通道表达增加导致体内钠潴留。这部分实验我们通过对血清和糖皮质激素诱导激酶1（SGK1）、上皮钠通道（ENa C）、钠钾二氯共转运体（NKCC2）和钠钾ATP酶（NKA）的研究,确定糖皮质激素对心衰大鼠盐代谢的调节作用。方法:用定量Western Blot技术检测肾脏内髓SGK1的表达。用定量Western Blot技术检测肾脏内髓集合管ENa C、NKCC2和NKA的表达,免疫组织化学技术确定钠通道相关蛋白的表达部位。结果:1.糖皮质激素下调心衰大鼠肾脏内髓组织α-ENa C的表达心衰伴稀释性低钠血症的大鼠肾脏ENa C表达丰度增加（P<0.05）。给予地塞米松预处理可以下调心衰大鼠肾脏ENa C的表达量（P<0.05）。而GR抑制剂RU486可以逆转地塞米松的这一作用（P<0.05）,提示地塞米松对ENa C的抑制作用是由糖皮质激素受体介导的。2.糖皮质激素下调心衰大鼠肾脏内髓组织NKCC2的表达在心衰伴稀释性低钠血症的大鼠其肾脏内髓组织NKCC2的表达明显高于假手术组（P<0.05）。地塞米松预处理显着降低了心衰大鼠NKCC2的表达丰度（P<0.05）。但是,给予RU486的大鼠,并没有逆转地塞米松的这种作用（P>0.05）。这说明地塞米松对NKCC2的抑制作用可能没有通过经典的GS途径。3.糖皮质激素对心衰大鼠肾脏内髓组织NKA的表达没有影响与假手术组相比,结果显示CHF组NKA的表达与假手术组并没有统计学差异（P>0.05）。同样,地塞米松预处理对心衰大鼠NKA表达无影响（P>0.05）。4.糖皮质激素下调心衰大鼠肾脏内髓组织SGK1的表达我们发现心衰大鼠肾脏SGK1的表达量明显高于假手术组（P<0.05）。地塞米松预处理可以下调心衰大鼠肾脏SGK1的表达（P<0.05）。但是我们并没有发现GS抑制剂RU486可以逆转心衰动物SGK1的表达（P>0.05）。第四部分糖皮质激素通过促进大鼠体内胱抑素C的产生增加循环中胱抑素C的水平目的:胱抑素C是一种新的内源性GFR标记物。有报道称糖尿病、甲状腺疾病、急性肾损伤、癌症、心脏功能障碍以及甾体类药物对循环中胱抑素C的水平有显着影响。因此,我们设计了本研究,以确定糖皮质激素对循环和肾脏功能中胱抑素C水平的影响。方法:1.将SD大鼠随机分为3组,正常对照组（CON）、地塞米松组（DEX）、糖皮质激素抑制剂组（DEX+RU486）。2.菊粉清除率的测定。3.用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血浆和肾、脑、肠、肝、肺五种组织胱抑素C。结果:1.地塞米松对血浆胱抑素C水平和菊粉清除率的影响治疗2天后,给予地塞米松的大鼠血浆中胱抑素C水平明显高于对照组大鼠。GR拮抗剂RU486完全逆转了地塞米松对胱抑素C水平的影响。但三组间肾菊粉清除率无统计学差异。2.DEX对组织中胱抑素C的影响为了研究DEX对胱抑素C的影响,我们采集了肾、脑、肠、肝、肺五种器官组织匀浆。糖皮质激素治疗组大鼠的胱抑素C水平明显高于对照组。与血浆胱抑素C水平的结果一致,RU486也能抵消DEX对上述组织中胱抑素C的影响结论:1.心衰大鼠肾脏水钠排泄能力降低、心脏功能严重受损,导致水钠潴留和稀释性低钠血症。给予地塞米松治疗可以显着增加心衰大鼠的水钠排泄能力,恢复正常的血浆渗透压,纠正稀释性低钠血症。地塞米松还可以增加心衰大鼠左心室的收缩力,恢复正常的左室舒张末期压力,改善心衰大鼠的左心功能。地塞米松的排钠利尿和改善心功能作用可以被糖皮质激素受体抑制剂RU486所消除,提示这些效应是糖皮质激素受体介导的。2.心衰大鼠的血浆AVP水平和肾脏V2R表达均较正常大鼠显着升高。地塞米松预处理可以降低血浆AVP,下调肾脏V2R蛋白表达丰度。地塞米松对血浆AVP和肾脏V2R的下调作用可以被RU486消除。说明糖皮质激素可以抑制精氨酸加压素系统。3.心衰大鼠肾脏内髓集合管AQP2和AQP3的表达增加造成体内水排泄受损,地塞米松可以下调肾脏AQP2和AQP3的表达,增加肾脏对水的排泄。心衰时,肾脏ENa C和NKCC2的表达增加,造成钠排泄障碍。地塞米松可以下调肾脏ENa C和NKCC2的表达,增加钠的排泄。以上说明糖皮质激素通过抑制精氨酸加压素途径调控下游水钠通道的蛋白表达,增加了心衰伴稀释性低钠血症大鼠的水钠排泄。4.糖皮质激素在不影响肾功能的情况下,可以促进组织中胱抑素C的产生,导致血清胱抑素C水平升高。
邓进[3]（2019）在《罗格列酮对慢性移植肾失功的治疗作用及其机制的实验研究》文中研究指明背景慢性移植肾失功（chronic renal allograft dysfunction,CRAD）是影响移植肾长期存活的主要原因,目前缺乏有效治疗手段。过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ）是配体激活的核激素受体,研究表明其在糖尿病肾病模型大鼠肾组织表达下调。PPARγ激动剂不但能改善胰岛素抵抗,还有抗纤维化和抗炎作用。但PPARy在CRAD肾组织的表达以及PPARy激动剂罗格列酮对CRAD的治疗作用及其机制尚不明确。目的评价PPARy在CRAD模型大鼠肾组织的表达及意义;在CRAD模型大鼠和TGF-β1 诱导 HK2 细胞上皮间充质转分化（epithelial-to-mesenchymal transition,EMT）基础上,分别用PPARγ激动剂罗格列酮、PPARy拮抗剂GW9662和ERK1/2抑制剂PD98059进行干预,从动物实验和细胞实验两方面共同探讨罗格列酮对大鼠模型CRAD的治疗作用及其机制。方法1.动物实验CRAD模型对照组大鼠接受F344-Lewis（LEW）原位肾移植,罗格列酮治疗组大鼠肾移植术后予5mg/kg/d罗格列酮治疗,F344和LEW单肾切除组大鼠接受单侧肾脏切除术。术后12周收获大鼠行肾功能、病理学、免疫组织化学和分子生物学检测。2.细胞实验用10ng/ml TGF-β1诱导HK2细胞EMT。分别用1、5、10μM罗格列酮预处理HK2细胞1h,再用TGF-β1刺激24h后收获细胞,检测fibronectin、collagen I、E-cadherin、α-SMA 和 p-ERK1/2 表达;用 GW9662 预处理 HK2 细胞 30min后,用罗格列酮处理1h,再用TGF-β1刺激24h后收获细胞,检测fibronectin、collagen I、E-cadherin 和 α-SMA 表达;分别用 1、5、10μMPD98059 预处理 HK2细胞 1h,再用 TGF-β1 刺激 24h 后收获细胞,检测 p-ERK1/2、fibronectin、collagen I、E-cadherin 和 α-SMA 表达。结果1.动物实验结果与单肾切除组大鼠相比,CRAD模型大鼠肾组织PPARγ表达下降,且PPARy表达与大鼠24h尿蛋白定量、尿微量白蛋白/肌酐比、血清肌酐、血尿素氮、Banff评分、肾脏纤维化程度、单核细胞浸润数目呈负相关。罗格列酮显着上调CRAD模型大鼠肾组织PPARγ表达,降低CRAD模型大鼠24h尿蛋白定量、尿微量白蛋白/肌酐比、血清肌酐和血尿素氮水平、Banff评分、肾组织纤维化程度、单核细胞浸润数目,抑制CRAD模型大鼠肾组织TGF-β-Smad3信号通路、NF-κB和ERK1/2 信号活化,减少 CRAD 模型大鼠肾组织 fibronectin、collagen Ⅰ、collagenⅣ、α-SMA、MCP-1、ICAM-1、TNF-α 和 IL-1β 表达,增加 CRAD 模型大鼠肾组织E-cadherin表达。2.细胞实验结果TGF-β1 诱导 HK2 细胞 fibronectin、collagen Ⅰ 和 α-SMA 表达增多,E-cadherin表达减少;罗格列酮呈剂量依赖性抑制TGF-β1所致fibronectin、collagen Ⅰ、α-SMA表达增多和E-cadherin表达减少;罗格列酮上述抑制作用被GW9662抑制。罗格列酮抑制TGF-β1所致HK2细胞ERK1/2活化,PD98059呈剂量依赖性抑制TGF-β1 所致 HK2 细胞 fibronectin、collagen Ⅰ、α-SMA 表达增多和 E-cadherin 表达减少。结论1.CRAD模型大鼠肾组织PPARγ表达下调,ERK1/2信号活化增强。2.PPARy激动剂罗格列酮能减轻CRAD模型大鼠肾间质纤维化、肾小管EMT和炎症反应。3.罗格列酮对CRAD模型大鼠的保护作用可能是通过激活PPARγ和抑制ERK1/2信号活化实现的。
张晓华[4]（2013）在《益气活血温阳利水法对心衰大鼠水潴留机制的实验研究》文中研究指明心力衰竭（简称心衰）属心血管疾病的急危重证,严重威胁人类健康,因心衰病人多伴有水肿、胸水、腹水等,故心衰也属水液代谢障碍性疾病,对于心衰水液潴留机制的研究,很多学者从多个系统进行过研究,包括肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）、精氨酸加压素系统、交感神经系统、内皮素系统、利钠肽系统（心房利钠肽、脑利钠肽）等等,随着水通道蛋白的发现,尤其是水通道蛋白2的出现,为研究心力衰竭水液潴留机制开辟了一个新的途径,精氨酸血管加压素-血管加压素V2受体-水通道蛋白2系统在心衰水液潴留过程中的作用逐渐被学者们重视及研究,现有学者指出心力衰竭水潴留机制的主要途径为心输血量下降-血管加压素水平升高-肾脏集合管V2受体激活-水通道蛋白2激活和／或基因表达上调-水重吸收增加,水通道蛋白2（AQP2）主要受精氨酸血管加压素（AVP）调控,而AVP通过肾脏V2受体调控AQP2,故AVP-V2受体-AQP2系统在调节机体水液代谢中起着重要作用。益气活血,温阳利水法是目前公认的治疗心衰的大法,是根据心衰的病机：气阳亏虚,血瘀水结而定的,目前中医药对于本法的实验研究主要集中在血流动力学、RAAS系统、利钠肽系统、心肌重塑等方面,对于水潴留机制的研究还处于起步阶段,现有研究主要是单味中药（如茯苓、泽泻、大黄、黄芪、丝瓜络等）对于水通道蛋白2的影响,也有部分学者应用中药复方观察其对水通道蛋白2的影响,而对于整个精氨酸血管加压素-V2受体-水通道蛋白2系统的研究较少,未能从整体上阐明本法对于心衰水潴留的作用机制。目的：研究益气活血温阳利水法对于心衰大鼠精氨酸血管加压素-V2受体-水通道蛋白2系统的影响,以探讨本法对心衰水液潴留的作用机理。方法：选择健康Wistar大鼠,应用腹腔注射阿霉素（3mg/kg,每周1次,连续6周）及睡眠剥夺,造成心衰大鼠模型,然后分空白组、模型组,芪苈强心组、中药高剂量、中剂量、低剂量6组,服药4周后应用ELISA法观察6组大鼠服药后血浆精氨酸血管加压素（AVP）浓度；应用免疫组化、蛋白印迹（Western-Blot）方法检测肾组织（近髓部）血管加压素V2受体（V2R）、水通道蛋白2（AQP2）蛋白表达情况；应用rt-PCR检测肾组织（近髓部）血管加压素V2受体、水通道蛋白2mRNA相对表达量的变化情况。结果：（?）较,有统计学差异；可减弱肾脏组织V2R、AQP2蛋白表达及m RNA相对表达量,结果优于模型组,以中、高剂量组为着。结论：益气活血温阳利水法通过降低血浆中AVP浓度,下调V2R、AQP2蛋白表达、m RNA因子表达来作用于精氨酸血管加压素-V2受体-水通道蛋白2系统的每个环节而起到改善水液潴留之目的。
董柔[5]（2012）在《热应激和热习服对大鼠水、盐代谢调节机理的研究》文中指出研究目的：观察大鼠在热环境下运动能力、体温变化、体液调节激素的变化,以及对下丘脑AVP合成和肾脏AVPV2R和AQP2的影响,对热应激、热习服条件下的机体水盐代谢机制进行较深入研究。研究方法：1.热应激组：雄性Wistar大鼠分为常温暴露组（N）、常温力竭组（E）、高温暴露组（H）和高温力竭组（HE）。N组不进行任何处理；E组常温环境运动到力竭；H组高温环境暴露60min; HE组高温环境运动到力竭,记录E、HE组力竭时间,各组大鼠体重丢失情况,测试Posm、血清AVP、 ALD、ANp、Na+、K+浓度,AVP mRNA表达,AVPV2R mRNA和蛋白表达,磷酸化的AQP2表达,AQP2mRNA和蛋白表达。2.热习服组：雄性Wistar大鼠分为常温暴露14天后高温力竭组（A）、常温运动14天后高温力竭组（B）、高温暴露14天后高温力竭组（C）和高温运动14天后高温力竭组（D）。A组无任何处理；B组常温环境运动14天；C组高温环境每天暴露60min共计14天；D组高温环境运动14天,第15天在高温环境下运动到力竭,测试指标同热应激组大鼠。研究结果：1.热应激组：HE组的运动时间明显短于E组,大鼠肛温升高,HE组体重丢失没有E组和H组明显,Posm曾高,血清AVP、 ALD浓度升高,ANP浓度降低,Na+浓度升高,K+浓度降低,Na+/K+比值升高,AVP mRNA、 AVPV2R mRNA和AQP2mRNA表达上调,磷酸化的AQP2免疫荧光表达增强。2.热习服组：大鼠力竭时间明显延长,机体水丢失更多,Posm升高更明显,肛温升高,大鼠血清AVP浓度降低,ALD浓度升高,但ANP变化不明显,AVP mRNA表达下调,AVPV2R mRNA和QP2mRNA表达上调,同时两者的蛋白表达上调。结论：1.大鼠在高温环境下运动能力明显降低,体重丢失显着,体温升高并且达到极限值。2.未热习服处理大鼠高温力竭运动后下丘脑AVP mRNA表达上调,肾脏磷酸化的AQP2表达增强,AQP2的短时调节在起作用。3.热习服的大鼠肾脏AVPV2R和AQP2蛋白表达增强,AQP2的长期调节提高了机体的保水能力。4.经过热习服处理后,大鼠下丘脑渗透压感受器“调定点"上移,血浆渗透压的变化与下丘脑分泌AVP出现不一致。
李战宾[6]（2013）在《胡桃夹综合征致肾脏病理生理改变的临床和实验研究》文中研究表明第一部分：成人单纯胡桃夹综合征致肾脏病理改变的研究目的研究单纯的胡桃夹综合征致人肾脏病理改变。方法对18例经彩超及CTA检查确诊患有胡桃夹综合征的成人患者进行尿沉渣红细胞形态和计数、尿常规、肾功能、24尿蛋白定量分析。结合临床症状排除可能同时合并有肾小球肾炎的患者,分别行左肾穿刺活检。采用石蜡切片的方法,结合光镜、免疫荧光和投射电镜技术对肾脏的显微结构、免疫复合物以及超微结构进行观察。结果18例患者中左侧肾脏光镜下肾小球系膜细胞、系膜基质未见明显变化,内皮细胞、毛细血管未见增生,肾间质及肾小管未见变化,免疫荧光（除两名乙肝病毒携带者免疫荧光提示HBSAg（+））均未见免疫复合物沉积,透射电镜下可见个别细胞胞浆内溶酶体增多呈空泡样,线粒体轻度肿胀变形。结论胡桃夹综合征不会引起左肾实质及功能发生明显改变,可以引起细胞出现轻度缺血性改变。第二部分左肾静脉受压对兔肾水通道蛋白AQP1、AQP2表达的影响目的通过不完全结扎左肾静脉建立符合胡桃夹综合征的动物模型,对左肾静脉受压后水通道蛋白AQP1和AQP2在肾小管的表达情况进行初步的研究,为胡桃夹综合症引起左肾的病理生理变化提供分子生物学基础材料。方法成年新西兰大白兔30只,随机分为三组：假手术组（A组）、50%结扎组（B组）、75%结扎组（C组）,2个月后,采用Western Blot方法分别检测水通道蛋白AQP1和AQP2在各组的表达水平。结果三组肾脏组织均可见AQPl及AQP2的表达,蛋白条带灰度值分析表明：AQP1在模型组的表达与假手术组相比均明显下降（P＜0.05）,75%结扎组与50%结扎组、假手术组相比AQP1的表达减少（P＜0.05）,差异有统计学意义；AQP2在假手术组与50%结扎组的表达水平无明显变化（P＞0.05）,75%结扎组与假手术组,、50%结扎组相比AQP2的表达水平明显下降（P＜0.05）,差异有统计学意义。结论左肾静脉高压使AQP1表达降低,随着血管受压的程度的增加表达的水平越低；AQP2在轻度受压时表达无明显变化,随着受压程度的加重表达水平开始下降。胡桃夹综合征能够通过影响水通道蛋白AQP1及AQP2的表达进一步影响肾脏的重吸收功能。
张晓钢[7]（2011）在《水、钙离子通道与脏腑功能的相关性研究》文中研究说明理论部分：目的：通过对“脏腑经络阴阳表里”相关古今文献的整合,提出“人身太极中脏腑与经络的统一”的“阴阳双鱼太极图”理论模型,谨从太极阴阳来论述五脏、六腑与经络之间的功能结构关系,使其能够从五行五脏之外的另一个视角阐释中医藏象学说的基本内容。方法：（1）先从《灵枢》、《素问》、《难经》等经典医籍,溯脏腑经络之本源；再从《灵枢注证发微》、《类经附翼》、《医贯》等各家注着,理脏腑经络之分流；最后集合源流以汇成海,讨论“脏腑经络阴阳相合”的理论整合。（2）结合部分我国民族医学中的有关脏腑理论的论述与现代医学研究成果,筛选出与中医三焦相关的表述给予总结。结果：（1）阴阳表里关系因其联系的密切程度不同,可以分为以下至少八种关系层次：①十二脏腑与十二经络之间具有阴阳表里的关系；②六脏与六腑之间、六条阴经与六条阳经之间也具有阴阳表里的关系；③六脏之间、六腑之间、六条阴经之间、六条阳经之间都具有阴阳表里关系；④三阳脏之间（肺、心主、心）、三阴脏之间（脾、肝、肾）、三阳腑之间（大肠、女子胞、小肠）、三阴腑之间（胃、胆、膀胱）、手三阴经之间、手三阳经之间、足三阴经之间、足三阳经之间等三个为一组的脏腑经络之间具有三阴三阳的密切关系。⑤六脏六腑与奇恒之腑之间、十二经脉与奇经八脉之间具有阴阳表里关系；⑥奇恒之腑（主要是脑与女子胞）与奇经八脉之间（主要是任脉与督脉）具有阴阳表里关系；⑦奇恒之腑内部之间、奇经八脉内部之间具有阴阳表里关系；⑧脏腑通过经络与形体之间形成阴阳表里关系。（2）三焦与组织通道关系密切,经络与低流阻通道关系密切。结论：（1）脏腑之有形有质者,才可与形体经络为阴阳表里；故知五脏与五腑相配表里,另一脏与一腑当为心主（脑）与命门（女子胞）。（2）经络是低流阻组织通道,三焦是普通组织通道,三焦是脏腑、经络、形体相联系的中枢纽带。实验部分：目的：通过研究“脏腑表里”关系中“肺与大肠相表里”的生理状态的不同生存状况下（正常、饥饿、饥渴、低氧、高氧）的“肺与大肠”功能结构的相关指标的变化（肺功能、肠推进、食水代谢、细胞膜通道蛋白、组织切片等）,来探讨“肺与大肠相表里”的生理机制与可能的物质基础；得出与“肺与大肠相表里”最为密切相关的实验指标,以利于实验室模型的确定,和进而以后的临床诊断的标准的确立；从而完善中医基础理论中藏象学说的部分内容,为脏腑经络阴阳表里的部分内容,尤其是“肺与大肠相表里”提供实验数据的支持。方法：采用雌性SD大鼠作为实验动物,使用代谢笼式可变氧饲养箱控制大鼠呼吸环境的氧浓度,使用代谢笼控制和测量大鼠食水代谢（尤其是进食量与进水量）,从而建立正常对照组、高氧组、低氧组、饥饿组、饥渴组等5组动物模型。使用苏木精-伊红（HE）染色大鼠肺肠组织切片,使用动物肺功能监测分析系统测量大鼠肺功能（FVC）,使用碳末阿拉伯胶注入回盲部的方法测量大鼠肠推进功能,使用酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠各种组织（肺、空肠、回肠、结肠、直肠、肾、膀胱等）内细胞膜通道蛋白（AQPl、AQP3、Cavl.2、Cav3.1等）的含量。结果：（1）各造模组对大鼠肺功能均有一定影响,尤其是高氧组、饥渴组的多数肺功能指标（FVC、FEVO.1、FEVO.3、FEVO.3/FVC％、FEF25-75、PEF等）均出现显着下降,饥饿组的FEVO.1下降也明显,仅低氧组肺功能各指标与对照组比较无变化；各造模组对肠推进均有一定影响,饥饿组与对照组比较肠推进距离及推进率均出现明显下降,推进率从高到低排序为低氧组肺功能后、对照组、高氧组肺功能后、低氧组、高氧组、饥渴组、饥饿组。各造模组对大鼠不同组织的细胞膜通道蛋白的含量有不同的影响,各组均使直肠AQP1含量升高,饥饿组使肾AQP1含量升高,其他各组与对照组比较没有明显变化；高氧组使直肠AQP3含量升高,饥饿组使肾的AQP3含量升高,其他各组与对照组比较没有明显变化；肺、空肠、回肠、肾的Cav2.1含量多为下降（除饥饿组空肠与肾）,饥饿组使结肠Cavl.2含量升高,其他各组与对照组比较没有明显变化；各造模组均使回肠的Cav3.1含量降低,高氧组、饥渴组使肺的Cav3.1含量降低,低氧组使肺的Cav3.1含量升高,高氧组使肾的Cav3.1含量降低,饥渴组使直肠Cav 3.1含量升高,其他各组与对照组比较没有明显变化。（2）不同造模条件下,不同组织的细胞膜通道蛋白（AQP1、AQP3、Cavl.2、Cav3.1）含量发生不同变化。结论：（1）肺主要与回肠、结肠存在一定的联系,尤其是与饥饿组、高氧组、低氧组的回肠和低氧组的结肠有密切关系,还与正常组、饥渴组的直肠与低氧组的空肠有一定关系；此外,高氧组、饥饿组、饥渴组分别导致肺功能与肠功能的抑制,证明“肺与大肠相表里”主要体现在肺与回肠在各种生理病理变化时的相关性；尤其是饥饿、低氧状态下,关系更为密切。因此,中医学“肺与大肠相表里”中的“大肠”,是指现代解剖学中空肠以下的所有肠段,包括：回肠、结肠、直肠等。中医学中的“大肠”（具体包括：回肠、盲肠、各段结肠、直肠等）与现代解剖学中的“大肠”（具体包括：盲肠、升结肠、横结肠、降结肠、乙状结肠、直肠等六部分）不可等同。（2）细胞膜通道蛋白的含量随造模条件的变化而增减,可能存在调控细胞接受外界物质、能量、信息等的作用,其作用可以解释为三焦通行三气过程中,受到造模条件的影响而对脏腑的营卫气供应产生变化所致。
郭炳华[8]（2010）在《泽黄颗粒对实验性糖尿病大鼠肾损害的治疗效应研究》文中研究说明DM是一种严重威胁人类健康的终身性、全身性疾病,且其发病率呈逐年递升的趋势。WHO报告称,1995年全世界DM患者将近1.25亿,预计至2025年全世界DM患者将达至2.99亿。DN为DM最严重、最常见的慢性并发症之一,也是DM患者主要的死亡原因。针对DN这一严重的、难治的DM微血管并发症,对其进行有效防治已成为医学界亟待解决的临床课题。泽黄颗粒是基于血瘀是DN的基本病理基础,并结合临床经验所研制的以化瘀利水法为主方的中药制剂。临床观察证实,该药在改善早期DN患者的水肿、血液流变学等症状、降低BUN、Scr等指标有较好疗效。为了进一步研究泽黄颗粒的临床效应机制,我们借助于免疫组织化学法、Real-time PCR法、Western-Blot法、ELASA法、病理学等研究手段,探讨泽黄颗粒对DN的保护效应及其机制,为该制剂的临床应用、开发与推广提供药理学证据和实验依据。主要实验结果报告如下:实验一泽黄颗粒对实验性糖尿病大鼠的药效学观察目的:探讨泽黄颗粒对STZ致DM大鼠肾损伤的保护机制及其对一般药效学指标和血液流变学指标的调节效应。方法:4周龄SPF级雄性Sprague-Dawlay（SD）大鼠共50只,体重为180-200g,随机分为正常组10只,糖尿病模型组40只。正常组进食普通饲料;糖尿病模型组进食高脂高糖饲料,在高脂高糖饲料喂养4周后以45mg/kg体重一次性空腹腹腔注射STZ,72h后监测血糖,以连续3次空腹血糖≥16.7mmol/L,尿糖阳性,尿微量白蛋白定性测量阳性者为糖尿病模型制备成功,造模成功大鼠35只,随机分为糖尿病模型组（DM组）12只、泽黄颗粒治疗组（Z组）12只、格列吡嗪对照组（G组）11只。用普通光镜和透射电镜观察各组大鼠肾组织病理变化,并测定各组大鼠BG、Hbalc、Scr、Ucr、BUN、UAER、TG、TC及血液流变学指标。结果:DM组大鼠均出现明显多饮、多食、多尿,且早期体重有所增加,后期一般情况变差,体重下降,皮毛无光泽,刺毛现象明显,易感染,BG、Hba1c、BUN、UAER、TG、TC、左肾重/体重、全血黏度、血浆黏度均明显高于N组大鼠,且Ccr明显低于N组大鼠（均P<0.05）。Z组和G组大鼠的BG、Hba1c、BUN、UAER、TG、TC、左肾重/体重、全血黏度、血浆黏度较DM组均显着下降（均P<0.05）,其中与G组相比,Z组下降更明显（P<0.05）。Z组和G组大鼠Ccr较DM组均明显升高,与G组相比,Z组下降升高更明显。HE染色观察到,N组大鼠肾小球结构清晰,肾小管上皮细胞排列整齐,基底膜完整,肾间质中未见炎症细胞浸润和纤维组织增生;DM组大鼠肾小球肥大,系膜区增宽,系膜细胞增生,球内可见大量红细胞淤积,肾小管上皮细胞肿胀脱落,呈空泡样变性;Z组大鼠肾小球内少见红细胞淤积,肾小管未见上皮细胞脱落,小管内少见蛋白管型。G组大鼠肾小球内可见红细胞淤积的情况,上皮细胞空泡状变性呈片状,肾小管偶见上皮细胞脱落。透射电镜观察到,N组大鼠肾小球结构正常,足突分布均匀,裂孔膜结构清晰;DM组大鼠可见基底膜增厚,系膜区明显增宽,系膜细胞和基质弥漫增宽,足突肿胀,部分小节段融合,局部裂孔膜减少消失;Z组及G组大鼠较DM组有所减轻,表现为系膜区增宽减轻,足突融合减轻,裂孔膜大部恢复。实验二泽黄颗粒对实验性糖尿病大鼠肾脏AQP1、AQP2和尿液AQP2表达的调节效应目的:观察泽黄颗粒对糖尿病大鼠肾脏AQP1、AQP2和尿液AQP2表达的调节效应。方法:动物造模方法同前。采用免疫组织化学、Western-Blot、Real-time PCR检测各组大鼠AQP1、AQP2蛋白和基因在肾脏的分布和表达水平,采用ELASA法检测大鼠尿液中AQP2的浓度。结果:AQP1在肾皮质内的近端小管和髓袢降支细段的细胞顶膜面均有表达,肾小球内无表达。四组大鼠肾脏AQP1蛋白和mRNA表达水平均无明显变化（均P>0.05）。AQP2蛋白在肾集合管、远端小管表达,而在肾小球内未见表达,Z组大鼠较DM组大鼠肾脏AQP2蛋白、mRNA表达水平和尿液AQP2浓度均明显降低（P<0.05）;肾脏AQP2蛋白含量与尿液AQP2浓度呈正相关（r=0.703,p<0.01）。实验三泽黄颗粒对实验性糖尿病大鼠肾脏足细胞相关蛋白Nephrin、Podocin表达的调节效应目的:观察泽黄颗粒糖尿病大鼠肾脏足细胞相关蛋白Nephrin、Podocin表达的调节效应。方法:动物造模方法同前。采用免疫组织化学、Western-Blot、Real-time PCR检测各组大鼠Nephrin、Podocin蛋白和基因在肾脏的分布及表达水平。结果:nephrin、podocin表达于肾小球裂孔膜位置,沿肾小球毛细血管襻呈均匀线状分布,肾小管及肾小囊无表达。Z组大鼠较DM组大鼠nephrin、podocin蛋白、mRNA表达水平均明显升高（P<0.05）。结论:1、泽黄颗粒能降低BG、Hba1c、BUN、UAER、TG、TC、左肾重/体重、全血黏度、血浆黏度等指标,较好地缓解了糖尿病大鼠的多饮、多食、多尿等症状,并可使其体重稳定增加,改善了DM大鼠的状态。2、泽黄颗粒可降低DM大鼠肾组织AQP2蛋白和mRNA的表达,可能是其“利水”药理效应的部分机制;泽黄颗粒亦可明显减少DM大鼠的尿量和尿液AQP2的浓度,且各组大鼠肾脏AQP2蛋白含量与尿液AQP2浓度呈正相关。并同时在我院建立了尿液AQP2的检测方法,为揭示DM中医“瘀水病证”本质与“化瘀利水”法研究提供了新的临床检测与评价指标。3、泽黄颗粒对DM大鼠肾组织内AQP1的表达水平无明显差异,AQP1是否参与DM时的水代谢异常有待进一步探讨。4、泽黄颗粒对肾脏的保护作用机制可能是通过增加nephrin、podocin表达、改善足细胞超微结构而实现,这亦可能是其“化瘀“的部分效应机制。
李真珍[9]（2010）在《水通道蛋白1-4在先天性肾积水肾组织中的表达及其临床意义》文中认为背景和目的先天性肾积水是小儿外科常见畸形,约占新生儿的1%-2%,是儿童终末型肾功能衰竭的重要原因。肾盂输尿管连接部梗阻（ureteropelvic junction obstruction, UPJO）是导致新生儿非生理性肾积水最常见的原因,约占儿童肾积水的10%,而且梗阻大部分为先天性不完全梗阻。尿液浓缩能力下降是积水肾脏早期的功能变化。积水肾脏尿液浓缩和排泄功能变化的分子生物学机制目前仍不完全清楚。Agre和其同事在90年代发现水通道蛋白（Aquaporins, AQPs）后,肾脏浓缩功能机理研究在分子水平上获得了重大进展。目前发现的13种水通道蛋白中分布于肾脏的有7种,主要分布在肾小球、近端小管、集合管和髓袢降支。其中现已明确AQP1-4是肾脏重吸收水浓缩尿液,从而维持机体水平衡的主要分子基础。为进一步揭示生理状态体液代谢平衡和病理状态下体液紊乱机制和寻找治疗及预防措施提供了较大帮助。研究表明,AQP1主要表达在肾单位的近端小管和髓袢下降支细段上皮细胞的顶质膜,而基侧膜则表达较少。AQP2是肾集合管柱状上皮细胞内最重要的水通道蛋白,是迄今为止所发现的唯一在细胞内分布受激素调控的水通道蛋白。AQP3位于集合管主细胞的基底膜和两侧膜上,在连接管也有大量的AQP3分布,AQP3既受加压素的调节,也受醛固酮调节。AQP4主要位于大鼠肾脏内髓集合管基底侧质膜上,可能参与集合管水分重吸收和尿液浓缩,但在近端小管S3节段基底侧质膜上也有表达。动物研究显示积水肾脏尿液浓缩及稀释功能的变化与AQPs的表达异常有关。双侧输尿管梗阻24h显着影响肾脏AQP1在近端小管和AQP2-4在集合管的表达,使其表达明显下调。该变化可能对双侧输尿管梗阻后水分重吸收障碍并引发低渗性多尿的病理生理过程起重要作用。单侧输尿管梗阻24h也可造成肾脏AQP1-4表达下调。AQPs的表达下降可能对单侧梗阻后水分重吸收障碍并引发低渗性多尿的病理生理过程起重要作用。上述研究结果均来自动物实验。目前,国内外文献对人类积水肾脏中AQP1-4的研究至今未见报道。对儿童积水肾脏中AQP1-4的研究无疑将有助于揭示小儿肾积水浓缩稀释功能变化的机制。有关AQP1-4 mRNA和蛋白表达与UPJO患儿积水肾脏超声形态、排泄功能、病理组织学改变和肾小球滤过率（glomerular filtration rate, GFR）之间关系尚不清楚,而了解这些是临床医生面临的重要课题。因此本研究目的为：①观察人类先天性积水肾脏中AQP1-4 mRNA和蛋白的表达与B超分类和静脉肾盂造影分类不同积水程度之间的关系；②观察不同病理组织学改变的小儿先天性积水肾脏组织中AQP1-4 mRNA和蛋白的表达情况；③观察先天性积水肾脏中AQP1-4蛋白的表达与肾实质厚度变化和肾小球滤过率变化之间的关系。1.收集22例接受肾盂成形术和肾造瘘术,经手术后病理证实的先天性UPJO肾脏标本（男15例,女7例,年龄58.9±54.3月）。病变部位均为单侧,其中右侧15例,左侧7例。正常肾脏组织8例（男5例,女3例,年龄58.0±37.7月）来自小儿外科行肾切除术的经手术后病理证实的肾母细胞瘤癌旁的正常肾组织。2.按照国际胎儿协会制定的根据肾实质厚度和肾盂肾盏扩张超声表现的分级标准将上述患儿分为Ⅲ级肾积水（轻度肾积水组）和Ⅳ级肾积水（重度肾积水组）。其中Ⅲ级肾积水8例,Ⅳ级肾积水14例。3.按照静脉肾盂造影（Intravenous Pyelography, IVP）显影时间的长短将上述患儿分为两组。轻度肾积水组（10例；IVP 60min内肾盂肾盏显影）和重度肾积水组（12例；IVP 60min内肾盂肾盏不显影）。4.利用免疫组织化学技术检测所有积水肾脏和正常肾脏标本中AQP 1-4在正常肾脏和积水肾脏中的表达与定位。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测AQP1-4 mRNA在所有积水肾脏和正常肾脏标本中的表达水平。蛋白免疫印迹法（Western Blot）分别检测AQP1-4蛋白在所有积水肾脏和正常肾脏标本中的表达水平。5.统计学处理：应用SPSS 13.0 for windows统计软件包进行统计学处理。计量资料采用均数±标准差表示；所有数值均近似正态分布,两组均数之间的比较用独立样本的t检验（t-test）,三组及三组以上均数的比较用单因素方差分析（ANOVA）。检验水准为P=0.05。结果1.免疫组织化学检测结果显示：AQP1阳性着色主要分布在肾近曲小管的上皮细胞和髓袢降支细段上皮细胞胞质,以及肾小球毛细血管内皮细胞胞质。AQP2阳性着色主要分布在肾集合管主细胞胞膜和胞质。AQP3阳性着色主要分布在肾集合管主细胞基底侧膜。AQP4阳性着色主要分布在肾内髓集合管主细胞基底侧膜。与正常肾脏组织中AQP1-4的表达强度相比,积水程度越重的肾脏组织中AQPl-4的阳性表达强度越弱。2.RT-PCR结果显示B超分类肾积水的重度肾积水组中AQP1-4 mRNA的相对表达量明显低于轻度肾积水组和正常肾脏组（AQP1：0.237±0.154 Vs.0.624±0.084 Vs.0.858±0.122；AQP2：0.283±0.124 Vs.0.583±0.112 Vs.0.976±0.134;AQP3：0.460±0.146 Vs.0.760±0.066 Vs.1.006±0.084；AQP4：0.196±0.124 Vs.0.439±0.076 Vs.0.739±0.201；P<0.01）。RT-PCR结果显示IVP分类肾积水的重度肾积水组中AQP1-4 mRNA的相对表达量明显低于轻度肾积水组和正常肾脏组（AQP 1：0.194±0.118 Vs.0.598±0.092 Vs.0.858±0.122；AQP2：0.247±0.089 Vs.0.566±0.105 Vs.0.976±0.134；AQP3：0.426±0.126 Vs.0.741±0.074 Vs.1.006±0.084；AQP4：0.171±0.115 Vs.0.420±0.081 Vs.0.739±0.201;P<0.01）。3.Western Blot结果显示B超分类肾积水的重度肾积水组中AQP1-4蛋白的相对表达量明显低于轻度肾积水组和正常肾脏组（AQP1：0.349±0.096 Vs.0.705±0.059 Vs.0.895±0.040；AQP2：0.242±0.113 Vs.0.609±0.037 Vs.0.868±0.084；AQP3：0.195±0.133 Vs.0.575±0.050 Vs.0.806±0.076；AQP4：0.241±0.067 Vs.0.598±0.074 Vs.0.809±0.079；P<0.01）。Western Blot结果显示IVP分类肾积水的重度肾积水组中AQP1-4蛋白的相对表达量明显低于轻度肾积水组和正常肾脏组（AQP 1：0.343±0.099 Vs.0.692±0.062 Vs.0.895±0.040；AQP2：0.217±0.126 Vs.0.567±0.069 Vs.0.868±0.084；AQP3：0.171±0.127 Vs.0.543±0.082 Vs.0.806±0.076；AQP4：0.225±0.063 Vs.0.537±0.078 Vs.0.809±0.079；P<0.01）。1.收集26例接受肾盂成形术和肾造瘘术,经手术后病理证实的先天性UPJO肾脏标本（男17例,女9例,年龄55.9±49.5月）。病变部位均为单侧,其中右侧15例,左侧11例。正常肾脏组织10例（男6例,女4例,年龄63.7±36.8月）来自小儿外科行肾切除术的经手术后病理证实的肾母细胞瘤癌旁的正常肾组织。2.将上述患儿根据其积水肾脏的病理组织学变化将其分为病理学分级Ⅱ-Ⅲ级组,即轻度肾积水组（12例）,和病理学分级Ⅳ-Ⅴ级组,即重度肾积水组（14例）。3.利用免疫组织化学技术检测所有积水肾脏和正常肾脏标本中AQP1-4在正常肾脏和积水肾脏中的表达与定位。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测AQP1-4 mRNA在所有积水肾脏和正常肾脏标本中的表达水平。蛋白免疫印迹法（Western Blot）分别检测AQP1-4蛋白在所有积水肾脏和正常肾脏标本中的表达水平。4.统计学处理：应用SPSS 13.0 for windows统计软件包进行统计学处理。计量资料采用均数±标准差表示；所有数值均近似正态分布,两组均数之间的比较用独立样本的t检验（t-test）,三组及三组以上均数的比较用单因素方差分析（ANOVA）。检验水准为P=0.05。结果1.免疫组织化学检测结果显示与第一部分中AQP1-4的免疫组化检测结果保持一致。2.RT-PCR结果显示病理学分级Ⅳ-Ⅴ级组,即重度肾积水组中AQP1-4mRNA的相对表达量明显低于轻度肾积水组和正常肾脏组（AQP1：0.154±0.12 Vs.0.618±0.10 Vs.0.858±0.12；AQP2：0.229±0.11 Vs.0.535±0.12 Vs.0.946±0.14；AQP3：0.402±0.15 Vs.0.7244±0.08 Vs.0.978±0.10;AQP4：0.169±0.11 Vs.0.423±0.08 Vs.0.756±0.18;P<0.01）。3.Western Blot结果显示病理学分级Ⅳ-Ⅴ级组,即重度肾积水组中AQP1-4蛋白的相对表达量明显低于轻度肾积水组和正常肾脏组（AQP1：0.335±0.096 Vs.0.697±0.057 Vs.0.878±0.051;AQP2：0.195±0.133 Vs.0.569±0.069 Vs.0.816±0.072；AQP3：0.229±0.104 Vs.0.553±0.089 Vs.0.797±0.081;AQP4：0.241±0.067 Vs.0.528±0.084 Vs.0.833±0.104；P<0.01）。材料与方法1.收集10例接受肾盂成形术和肾造瘘术,经手术后病理证实的先天性UPJO肾脏标本（男6例,女4例,年龄62.3±18.3月）。病变部位均为左侧。正常肾脏组织6例（男4例,女2例,年龄62.7±17.1月）来自郑州大学第一附属医院小儿外科行肾切除术的经手术后病理证实的肾母细胞瘤癌旁的正常肾组织。2.10例患儿均接受B超检测来验证肾实质厚度,同时接受核素99mTc-DTPA肾动态显像对患侧肾脏GFR进行评估。手术过程中对肾积水程度进行再次评估,重点观察肾实质厚度。3.利用蛋白免疫印迹法（Western Blot）分别检测AQP1-4蛋白在所有积水肾脏和正常肾脏标本中的表达水平。4.统计学处理：应用SPSS 13.0 for windows统计软件包进行统计学处理。计量资料采用均数±标准差表示；所有数值均近似正态分布,两组均数之间的比较用独立样本的t检验（t-test）。积水肾脏中AQP1-4蛋白的相对表达量与99mTc-DTPA测定的GFR,以及积水肾脏肾实质厚度之间进行Pearson相关分析检验是否具有相关性,r值为Pearson相关系数。双侧P<0.05时认为有显着性差异。结果1.Western Blot结果显示正常肾脏组织中AQP1-4蛋白相对表达量分别为0.744±0.21、0.844±0.19、0.82±0.20和0.82±0.14,先天性积水肾脏组织中AQP1-4的相对表达量分别为0.40±0.14、0.48±0.18、0.47±0.21和0.55±0.22。正常肾组织中AQP1-4蛋白相对表达均明显高于肾积水组（P<0.05）。2.先天性肾积水患儿术前测量患侧肾脏肾实质厚度为1.8-8.5mm,平均为4.59±2.25mm。99mTc-DTPA测定患儿患侧肾脏GFR为24.01-56.65ml/min,平均为39.93±11.52ml/min。对侧肾脏GFR为84.08-118.09ml/min,平均为105.36±20.38ml/min。患侧肾脏GFR较对侧肾脏明显下降（P<0.05）。3.积水肾脏中AQP1-4蛋白相对表达量与积水侧肾脏肾实质厚度之间的相关性分析结果显示AQP1-4蛋白相对表达量与积水侧肾脏肾实质厚度之间的相关性系数r分别为0.754、0.724、0.726和0.716。P值分别为0.012、0.018、0.017和0.02,均<0.05,说明积水肾脏中AQP1-4蛋白相对表达量与肾实质厚度之间呈正相关。积水肾脏中AQP1-4蛋白相对表达量与积水侧肾脏GFR之间的相关性分析结果显示AQP1-4蛋白相对表达量与积水侧肾脏GFR之间的相关性系数r分别为0.690、0.705、0.691和0.750。P值分别为0.027、0.023、0.027和0.012,均<0.05,说明积水肾脏中AQP1-4蛋白相对表达量与患侧肾脏GFR之间呈正相关。积水侧肾脏肾实质厚度与积水侧肾脏GFR之间的相关性分析结果显示积水侧肾脏肾实质厚度与积水侧肾脏GFR之间的相关性系数r=0.728,P值为0.017,P<0.05,说明积水侧肾脏肾实质厚度与GFR之间呈正相关。结论通过上述三部分的研究得出以下结论。1.AQP1-4 mRNA和蛋白的表达在先天性积水肾脏中呈低表达,并且随着积水程度的加重,AQP1-4 mRNA和蛋白的表达越来越低。这提示在人类先天性积水肾脏中AQP1-4 mRNA和蛋白的表达量的降低与超声分级的肾积水程度的加重成一定的比例,AQP1-4的表达降低可能是引起积水肾脏形态功能改变的早期因素之一。2AQP1-4 mRNA和蛋白在IVP不显影积水肾脏中的表达明显下降。这提示AQP1-4在先天性积水肾脏中的表达降低,且随着IVP显影情况的不同而出现明显变化,表明AQP1-4在肾积水发展进程中可能与肾脏分泌功能的下降有一定的关系。3.小儿先天性积水肾脏中AQP1-4 mRNA和蛋白表达均下调,且随着积水肾脏病理改变的严重程度而变化。提示AQP1-4表达水平的变化可能在先天性肾积水的病理发展过程中发挥着一定的作用。4.积水肾脏中AQP1-4蛋白相对表达量与肾实质厚度、肾脏GFR之间呈正相关。这提示AQP1-4蛋白表达量下降与积水肾实质厚度和积水肾脏GFR的变化有一定的相关性,为进一步了解肾实质厚度越薄肾脏尿液浓缩稀释功能越差现象的机理研究提供了客观依据。
廉波[10]（2010）在《内毒素致肾集合管上皮细胞损伤与水通道蛋白2表达变化的实验研究》文中研究指明目的内毒素血症是梗阻性黄疸时肾功能损害的重要的病理生理机制之一。之前本课题组通过研究大鼠梗阻性黄疸动物实验时发现,梗阻性黄疸时,肾集合管上皮细胞中AQP2的表达显着降低。本实验拟在大鼠内毒素血症模型及细胞水平上明确内毒素对大鼠肾集合管上皮细胞的作用,以及水通道蛋白2表达的变化。方法选WISTAR大鼠用腹腔注射方法建立内毒素血症大鼠模型,根据LPS的作用时间处死取肾髓质,用免疫荧光及Western Blot方法检测AQP2表达。培养并传代大鼠肾髓质上皮细胞系mIMCD-3,选取处于指数生长期的细胞制作细胞爬片,免疫组化DAB染色法检测水通道蛋白2在大鼠肾髓质上皮细胞mIMCD-3的表达。分别用终浓度为0.1,0.5,1,5,10μg/L的内毒素与大鼠肾髓质上皮细胞mIMCD-3培养4h,8h,12h,24h后用CCK-8检测吸光度,计算细胞抑制率。选取作用明显的终浓度为10μg/L的内毒素分别作用于mlMCD-3及AQP2质粒转染后的mlMCD-3,在作用4h,8h,12h,24h后流式细胞仪检测凋亡。所有计数资料均用均数±标准差形式表示,运用统计软件SPSS13.0进行分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果免疫组化和DAB染色可见,细胞胞浆中大量棕红色颗粒,呈片或呈堆积状排列,证明mIMCD-3表达AQP2。LPS抑制肾髓质上皮细胞mIMCD-3增殖。浓度低于5μg/L时,LPS的浓度变化对细胞增殖的抑制作用差别不大,增大浓度梯度时,LPS对细胞的抑制作用明显增强,具有浓度依赖性。浓度为0.1μg/L的LPS在对细胞作用的早期,对细胞不仅没有抑制,反而有增殖的作用。当作用时间增加到24小时时,相邻浓度组间的比较不具有统计学差异,各组间细胞的抑制率无差别。不同时间组分别行单因素方差比较,具有统计学差异（P<0.05）。但0.1μg/L组4小时和8小时,0.5μg/L组4小时和8小时,8小时和12小时比较,1μg/L组4小时和8小时比较,不具有统计学差异（P>0.05）。证明浓度低于1μg/L时,细胞的抑制率随时间变化不大。浓度大于等于5μg/L时,任意两两组间对比均具有统计学差异。LPS对mIMCD-3的抑制作用具有时间依赖性。LPS诱导肾髓质上皮细胞mIMCD-3凋亡。将终浓度为10μg/L的LPS溶液作用于肾髓质上皮细胞mIMCD-34h,8h,12h和24h后,经流式细胞仪检测,结果表明,LPS对mIMCD-3的抑制作用主要表现为细胞凋亡,随作用时间的延长,细胞凋亡率增加。对肾髓质上皮细胞mIMCD-3行组化染色可以看出,LPS作用于mIMCD-3后,AQP的表达下调,细胞中棕黄色颗粒变稀疏,且颜色变浅。浓度为10μg/L的LPS作用细胞4小时,8小时,12小时和24小时的平均光密度分析,作用时间4小时和对照组比较,不具有统计学差异,作用时间达到8小时后随作用时间延长AQP2表达逐渐下调。证明在短时间内,时间小于4小时,LPS对AQP2表达的变化没有影响,但随LPS作用时间的延长,AQP2的表达下降。结论LPS可以造成肾髓质的损伤。LPS可以早期导致大鼠肾髓质AQP2表达下调,并且作用强度随时间延长而增加。LPS能够抑制mIMCD-3增殖,具有时间依赖性和剂量依赖性。LPS对细胞增殖的抑制作用主要表现为诱导细胞凋亡。随作用时间延长,细胞凋亡率增加。AQP2高表达的细胞在LPS作用后凋亡率较正常细胞降低,AQP2的高表达可以抑制mIMCD-3的凋亡。
二、左肾静脉不全结扎对大鼠肾水通道蛋白1和水通道蛋白2 mRNA表达的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、左肾静脉不全结扎对大鼠肾水通道蛋白1和水通道蛋白2 mRNA表达的影响（论文提纲范文）
（1）基于“肾主水”理论探讨金匮肾气丸治疗慢性肾功能衰竭的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Absract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 金匮肾气丸治疗腺嘌呤慢性肾功能衰竭大鼠实验研究 |
| 1 实验材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品与试剂 |
| 1.3 实验仪器与设备 |
| 1.4 实验动物分组 |
| 1.5 给药方法 |
| 1.6 观察指标 |
| 1.7 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 各组大鼠一般情况 |
| 2.2 各组大鼠体重变化 |
| 2.3 各组大鼠血常规与生化指标 |
| 2.4 各组大鼠24hU-TP |
| 2.5 腺嘌呤复制CRF大鼠模型 |
| 2.6 金匮肾气丸治疗后各组大鼠肾脏形态 |
| 2.7 金匮肾气丸治疗后各组大鼠肾脏病理 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 金匮肾气丸治疗UUO慢性肾功能衰竭大鼠实验研究 |
| 1 实验材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品与试剂 |
| 1.3 实验仪器与设备 |
| 1.4 实验动物分组 |
| 1.5 UUO法复制CRF大鼠模型 |
| 1.6 给药方法 |
| 1.7 观察指标 |
| 1.8 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 各组大鼠一般情况 |
| 2.2 各组大鼠体重变化 |
| 2.3 各组大鼠血常规与生化指标 |
| 2.4 各组大鼠24hU-TP |
| 2.5 UUO法复制CRF大鼠模型 |
| 2.6 金匮肾气丸治疗后各组大鼠肾脏外形 |
| 2.7 金匮肾气丸治疗后各组大鼠肾脏病理 |
| 3、讨论 |
| 4、小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 慢性肾功能衰竭大鼠水通道蛋白表达的实验研究 |
| 1 实验材料和方法 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备 |
| 1.4 实验AQP检测 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 各组大鼠肾脏AQP蛋白检测结果 |
| 2.2 各组大鼠肺脏AQP蛋白检测结果 |
| 2.3 各组大鼠膀胱AQP蛋白检测结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结语 |
| 附录 文献综述 |
| 文献综述一 慢性肾功能衰竭研究进展 |
| 文献综述二 慢性肾功能衰竭中医药研究进展 |
| 文献综述三 水通道蛋白(AQPs)的相关研究进展 |
| 参考文献 |
| 读博期间发表的文章及参与的科研 |
| 致谢 |
（2）糖皮质激素通过抑制精氨酸加压素通路逆转急性水负荷心衰大鼠稀释性低钠血症（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 糖皮质激素改善心衰大鼠水钠排泄和左心功能 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 糖皮质激素对心衰时精氨酸加压素通路的作用及分子生物学机制 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 糖皮质激素通过精氨酸加压素通路逆转心衰大鼠体内钠排泄 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 糖皮质激素通过促进大鼠体内胱抑素 C 的产生增加循环中胱抑素 C 的水平 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 糖皮质激素促利尿作用的机制 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）罗格列酮对慢性移植肾失功的治疗作用及其机制的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 实验材料与方法 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验仪器和设备 |
| 1.2 主要试剂和材料 |
| 1.3 常用缓冲液和试剂配制方法 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 动物模型构建和分组 |
| 2.2 动物标本收集 |
| 2.3 酶联免疫吸附测定法检测大鼠尿微量白蛋白 |
| 2.4 大鼠尿肌酐检测 |
| 2.5 组织病理学检测 |
| 2.6 Western blot检测 |
| 2.7 实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR) |
| 2.8 细胞培养及其干预实验 |
| 3. 统计学处理 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间成果 |
| 英文缩写词简表 |
| 致谢 |
（4）益气活血温阳利水法对心衰大鼠水潴留机制的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 前言 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述1 心力衰竭中医病机及辨证论治研究进展 |
| 1 病名论述 |
| 2 病机及证候演变 |
| 3 辨证论治 |
| 4 中医药对于心衰发病机理的研究 |
| 5 中医药关于心衰的临床研究 |
| 6 问题与展望 |
| 综述2 中医药对于心力衰竭水潴留机制的研究进展 |
| 1 现代医学对于心衰水潴留机制的认识 |
| 2 中医学对于心衰水潴留机制的认识 |
| 3 中医学对于心衰水潴留机制的实验研究 |
| 4 问题与展望 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1 实验材料与方法 |
| 2 实验1 心力衰竭大鼠模型的建立 |
| 3 实验2 益气活血温阳利水法对血浆中精氨酸血管加压素浓度的影响 |
| 4 实验3 益气活血温阳利水法对大鼠肾脏组织V2R及AQP-2蛋白表达的影响 |
| 4.1 免疫组织化学法 |
| 4.2 Western blot 法 |
| 5 实验4 益气活血温阳利水法对大鼠肾脏组织V2R及AQP-2 mRNA表达的影响 |
| 第三部分 讨论 |
| 1 慢性心衰的中医学认识 |
| 1.1 气阳亏虚 血瘀水结是慢性心力衰竭的病机关键 |
| 1.2 益气活血温阳利水是慢性心力衰竭的治疗大法 |
| 2 益气活血温阳利水方释义及方药分析 |
| 2.1 方药经典记载及其配伍关系 |
| 2.2 方药现代药理研究 |
| 3 动物实验研究结果分析 |
| 3.1 动物模型分析 |
| 3.2 对肾脏精氨酸血管加压素的影响 |
| 3.3 对肾脏组织血管加压素V2受体的影响 |
| 3.4 对肾脏组织水通道蛋白2表达的影响 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附图 |
（5）热应激和热习服对大鼠水、盐代谢调节机理的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 前言 |
| 1.1 选题依据与意义 |
| 1.2 研究内容 |
| 1.3 研究假设 |
| 1.4 实验总体设计和技术路线 |
| 2 文献综述 |
| 2.1 机体水、电解质平衡与调节 |
| 2.1.1 抗利尿激素 |
| 2.1.2 肾素-血管紧张素-醛固酮系统 |
| 2.1.3 心房钠尿肽 |
| 2.1.4 体液调节激素之间相互作用的关系 |
| 2.2 肾脏AQP2的研究进展 |
| 2.2.1 升压素对肾集合管水通透性的调节 |
| 2.2.2 升压素对集合管水通道蛋白调节的细胞机制 |
| 2.2.3 AQP2在水平衡紊乱中的研究进展 |
| 2.3 热习服的研究进展 |
| 2.3.1 热习服后的生理表现 |
| 2.3.2 热习服的生理基础 |
| 2.3.3 热习服的手段 |
| 3 材料与方法 |
| 3.1 实验动物 |
| 3.2 实验动物运动方案 |
| 3.2.1 实验动物处理方案 |
| 3.2.2 实验动物正式实验和取材 |
| 3.2.3 高温实验室环境条件控制 |
| 3.3 测试指标及方法 |
| 3.3.1 力竭时间 |
| 3.3.2 大鼠脱水情况 |
| 3.3.3 大鼠肛温 |
| 3.3.4 血液及组织的采集与处理 |
| 3.3.5 下丘脑AVP mRNA、肾脏AVPV2R mRNA、AQP2 mRNA表达 |
| 3.3.6 大鼠肾脏AVPV2R和AQP2蛋白表达 |
| 3.3.7 大鼠肾脏AQP2蛋白的免疫荧光 |
| 3.4 统计学处理 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 热习服组大鼠每日监测出汗量和肛温结果 |
| 4.2 大鼠运动能力的变化 |
| 4.3 大鼠生理机能的变化 |
| 4.3.1 大鼠脱水情况 |
| 4.3.2 大鼠肛温的变化 |
| 4.3.3 大鼠血浆渗透压(Posm)的变化 |
| 4.3.4 大鼠水、盐代谢调节激素浓度的改变 |
| 4.3.5 大鼠血清离子浓度的变化 |
| 4.4 大鼠下丘脑AVP mRNA表达 |
| 4.5 大鼠肾脏AVPV2R的变化 |
| 4.5.1 大鼠肾脏AVPV2R mRNA表达的变化 |
| 4.5.2 大鼠肾脏AVPV2R蛋白表达的变化 |
| 4.6 大鼠肾脏AQP2的变化 |
| 4.6.1 大鼠肾脏磷酸化的AQP2表达 |
| 4.6.2 大鼠肾脏AQP2 mRNA表达 |
| 4.6.3 大鼠肾脏AQP2蛋白表达 |
| 5 分析与讨论 |
| 5.1 大鼠热习服的效果 |
| 5.2 热应激和热习服对大鼠运动能力的影响 |
| 5.3 热应激和热习服对大鼠调节水、盐代谢激素的影响 |
| 5.3.1 热应激和热习服对血清AVP含量的影响 |
| 5.3.2 热应激和热习服对血清ALD含量的影响 |
| 5.3.3 热应激和热习服对血清ANP含量的影响 |
| 5.4 热应激和热习服对大鼠下丘脑AVP mRNA表达的影响 |
| 5.5 热应激和热习服对大鼠肾脏AVPV2R mRNA和蛋白表达的影响 |
| 5.6 热应激和热习服对大鼠肾脏AQP2的影响 |
| 5.6.1 热应激和热习服对大鼠肾脏磷酸化AQP2表达的影响 |
| 5.6.2 热应激和热习服对大鼠肾脏AQP2 mRNA和蛋白表达的影响 |
| 6 结论 |
| 7 本论文创新点及不足之处 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简历 在读期间发表的学术论文与研究成果 |
（6）胡桃夹综合征致肾脏病理生理改变的临床和实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表（Abbreviations) |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 成人单纯胡桃夹综合征致肾脏病变的研究 |
| 1 临床资料 |
| 2 研究方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 第二部分 左肾静脉受压对兔肾水通道蛋白AQP1、AQP2表达的影响 |
| 1 材料选择 |
| 2 实验动物模型制备 |
| 3 水通道蛋白AQP1、AQP2分析—Western Blot |
| 4 结果 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 7 参考文献 |
| 综述 水通道蛋白与肾脏 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历及研究生期间发表的论文 |
（7）水、钙离子通道与脏腑功能的相关性研究（论文提纲范文）
| 目录 摘要 Abstract 英文缩略语 上篇:综述部分 |
| 综述一:"肺与大肠相表里"的相关研究进展 |
| 1 脏腑表里关系中"肺与大肠相表里"的理论研究与争论 |
| 1.1 对"肺与大肠相表里"的质疑 |
| 1.2 对"肺与大肠相表里"的肯定 |
| 2 脏腑表里关系中"肺与大肠相表里"的实验证实研究 |
| 3 脏腑表里关系中"肺与大肠相表里"的临床应用研究 |
| 参考文献 |
| 综述二:水通道蛋白、钙离子通道的相关研究进展 |
| 1 水通道蛋白的相关研究进展 |
| 1.1 分布与分类 |
| 1.2 结构与功能 |
| 1.3 研究进展 |
| 1.4 小结 |
| 2 钙离子通道的相关研究进展 |
| 2.1 钙离子通道的种类 |
| 2.2 钙离子的重要性 |
| 2.3 钙离子通道与中医药 |
| 2.4 小结 |
| 参考文献 |
| 综述三:水通道蛋白、钙离子通道与中医脏腑的相关性研究 |
| 1 水通道蛋白与中医脏腑的相关性研究 |
| 1.1 津液是水通道蛋白与中医脏腑关联的物质基础 |
| 1.2 中医脏腑与水通道蛋白相关性的理论探讨 |
| 2 钙离子通道与中医脏腑的相关性研究 |
| 3 水、钙离子通道与三焦的理论探讨 |
| 3.1 有关三焦的认识 |
| 3.2 "细胞膜通道——三焦"假说的提出 |
| 参考文献 中篇:理论研究部分 |
| 前言 |
| 理论研究一:"脏腑经络阴阳表里"关系的初步研究 |
| 1 "脏腑经络阴阳表里"关系的古代理论研究 |
| 1.1 《灵枢》、《素问》、《难经》中的脏腑经络阴阳表里关系 |
| 1.2 古代医家论述的脏腑经络阴阳表里关系 |
| 2 脏腑表里关系中的理论探讨 |
| 2.1 关于"心、肺独去大、小肠远"的原因分析 |
| 2.2 从胚胎学讨论脏腑表里关系 |
| 3 脏腑经络阴阳表里关系的内涵探讨 |
| 3.1 脏腑经络阴阳表里的内涵及层次结构 |
| 3.2 中医学中的人身太极之应用 |
| 3.3 脏腑经络相合而为人身之太极 |
| 理论研究二:三焦实质相关研究 |
| 1 民族医学与中医学在脏腑学说的区别 |
| 1.1 藏医学蒙医学与中医学的区别 |
| 1.2 维吾尔医学与中医学的区别 |
| 1.3 朝鲜医学与中医学的区别 |
| 1.4 壮医学与中医学的区别 |
| 1.5 其他民族医学中类似三焦的论述 |
| 2 三焦与三气 |
| 3 三焦与组织通道 |
| 4 经络与水通道 |
| 5 三焦与经络、脏腑的实质 |
| 讨论 |
| 参考文献 下篇:实验研究部分 水、钙离子通道与脏腑功能的相关性研究 |
| 前言 |
| "肺与大肠相表里"动物模型的准备 |
| 1 氧浓度的选择与控制氧浓度的设备 |
| 1.1 氧箱的设计 |
| 1.2 氧浓度的选择 |
| 2 食水量的选择与控制 |
| 3 细胞膜通道蛋白的实验指标的选择 |
| 3.1 水通道蛋白的选择 |
| 3.2 水通道蛋白的肺肾相关性研究 |
| 3.3 其他相关脏腑的水通道蛋白研究 |
| 参考文献 |
| 材料和方法总述 |
| 1 实验动物与组织材料 |
| 1.1 实验动物与饲料 |
| 1.2 组织材料 |
| 2 主要仪器设备 |
| 3 主要试剂 |
| 4 实验方法 |
| 4.1 动物模型的建立 |
| 4.2 食水代谢的测量 |
| 4.3 肺功能的测量 |
| 4.4 肠推进的测量 |
| 4.2 细胞膜通道蛋白的测量 |
| 5 数据统计 |
| 6 实验总过程示意图 |
| 实验研究一:清气多寡对大鼠食水代谢的影响 |
| 摘要 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物及饲料 |
| 1.2 实验器材 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 实验条件 |
| 1.5 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 SD大鼠体重变化 |
| 2.2 SD大鼠食水代谢量的变化 |
| 2.3 SD大鼠体重、食水代谢总结果 |
| 2.4 肺肠解剖学和组织学观察与分析 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验研究二:肺功能与肠推进相关性研究 |
| 摘要 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物及饲料 |
| 1.2 实验器材 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 实验条件 |
| 1.5 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 肺功能实验结果 |
| 2.2 肠推进实验结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验研究三:细胞膜通道蛋白与三焦相关性研究 |
| 摘要 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物及饲料 |
| 1.2 实验器材 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 实验条件 |
| 1.5 统计分析 |
| 2 细胞膜通道蛋白的含量测定结果 |
| 2.1 各组大鼠不同组织AQP1含量变化 |
| 2.2 各组大鼠不同组织AQP3含量变化 |
| 2.3 各组大鼠不同组织Cav1.2含量变化 |
| 2.4 各组大鼠不同组织Cav3.1含量变化 |
| 3 细胞膜通道蛋白的含量测定讨论 |
| 参考文献 |
| 总讨论 |
| 1 肺与肠的联系 |
| 2 肾与腑的联系 |
| 3 三焦与通道蛋白 |
| 结语 |
| 1 论文的意义与创新 |
| 2 论文的不足之处 |
| 3 研究展望 致谢 个人简介 |
（8）泽黄颗粒对实验性糖尿病大鼠肾损害的治疗效应研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 正文 |
| 实验一 泽黄颗粒对实验性糖尿病大鼠的药效学观察 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验二 泽黄颗粒对实验性糖尿病大鼠肾脏AQP1、AQP2 和尿液AQP2 表达的调节效应 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验三 泽黄颗粒对实验性糖尿病大鼠肾脏足细胞相关蛋白Nephrin、Podocin 表达的调节效应 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（9）水通道蛋白1-4在先天性肾积水肾组织中的表达及其临床意义（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 水通道蛋白(AQP1、AQP2、AQP3、AQP4)在先天性肾积水患儿不同程度积水肾脏中的表达及意义 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 附图 |
| 附表 |
| 第二部分 小儿先天性积水肾脏病理改变与水通道蛋白(AQP1、AQP2、AQP3、AQP4)表达变化之间的相关研究 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 附图 |
| 附表 |
| 第三部分 先天性积水肾脏中水通道蛋白(AQP1、AQP2、AQP3、AQP4)表达与积水肾脏实质厚度和肾小球滤过率之间的相关性研究 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 附图 |
| 附表 |
| 参考文献 |
| 综述 先天性肾积水和水通道蛋白的研究新进展 |
| 参考文献 |
| 主要中英文缩略词表 |
| 个人简历 |
| 博士研究生期间发表论文 |
| 博士研究生期间参与会议 |
| 博士研究生期间参与课题研究 |
| 致谢 |
（10）内毒素致肾集合管上皮细胞损伤与水通道蛋白2表达变化的实验研究（论文提纲范文）
| 一、摘要 |
| 中文论着摘要 |
| 英文论着摘要 |
| 二、英文缩略语 |
| 三、论文 |
| 论文一 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 论文二 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 论文三 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 四、本研究创新性的自我评价 |
| 五、参考文献 |
| 六、附录 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、左肾静脉不全结扎对大鼠肾水通道蛋白1和水通道蛋白2 mRNA表达的影响（论文参考文献）
- [1]基于“肾主水”理论探讨金匮肾气丸治疗慢性肾功能衰竭的实验研究[D]. 边红萍. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [2]糖皮质激素通过抑制精氨酸加压素通路逆转急性水负荷心衰大鼠稀释性低钠血症[D]. 朱晓冉. 河北医科大学, 2020(06)
- [3]罗格列酮对慢性移植肾失功的治疗作用及其机制的实验研究[D]. 邓进. 南方医科大学, 2019(06)
- [4]益气活血温阳利水法对心衰大鼠水潴留机制的实验研究[D]. 张晓华. 长春中医药大学, 2013(09)
- [5]热应激和热习服对大鼠水、盐代谢调节机理的研究[D]. 董柔. 北京体育大学, 2012(11)
- [6]胡桃夹综合征致肾脏病理生理改变的临床和实验研究[D]. 李战宾. 郑州大学, 2013(11)
- [7]水、钙离子通道与脏腑功能的相关性研究[D]. 张晓钢. 北京中医药大学, 2011(09)
- [8]泽黄颗粒对实验性糖尿病大鼠肾损害的治疗效应研究[D]. 郭炳华. 第四军医大学, 2010(06)
- [9]水通道蛋白1-4在先天性肾积水肾组织中的表达及其临床意义[D]. 李真珍. 郑州大学, 2010(04)
- [10]内毒素致肾集合管上皮细胞损伤与水通道蛋白2表达变化的实验研究[D]. 廉波. 中国医科大学, 2010(07)
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